1.一种基于石墨烯纳米ZnOAuNPs的电化学传感器的制备方法,其特征在于包括以下步骤:步骤1:氧化石墨烯的制备:称取氧化石墨烯溶解于去离子水中,超声,制得氧化石墨烯悬浮液;
步骤2:纳米ZnO的制备:将CO(NH2)2与ZnCl2按摩尔比(1.5‑2.5)∶1加入去离子水‑无水乙醇溶液中溶解,加热升温至75‑80℃,同时匀速搅拌,反应1‑2h后,过滤洗涤,得到ZnCO3·
2Zn(OH)2·H2O将ZnCO3·2Zn(OH)2·H2O真空干燥箱,然后置于马弗炉中焙烧,得到淡黄色的纳米ZnO粉末;
步骤3:金纳米粒子溶液的制备:将氯金酸溶液加入去离子水,再加入Na2CO3溶液,一边搅拌器搅拌,一边分多次加入硼氢化钠溶液,直至溶液颜色变为酒红色,继续搅拌后,结束反应,获得金纳米粒子溶液,保存备用;
步骤4:纳米ZnOAuNPs复合物的制备:将等量纳米ZnO加入AuNPs中,超声使其充分分散,得到纳米ZnOAuNPs复合物;
步骤5:玻碳电极预处理:工作玻碳电极在麂皮上用纳米级氧化铝和去离子水进行打磨抛光;然后用无水乙醇浸泡超声清洗,最后用去离子水超声清洗;
步骤6:取氧化石墨烯悬浮液垂直涂滴在GCE电极表面,烘干得到石墨烯修饰的GCE电极;继续涂滴纳米ZnOAuNPs复合物,烘干,制得石墨烯纳米ZnOAuNPsGCE电极;
步骤7:将电极置于3‑羟基丙酸水溶液,恒温反应;将修饰有3‑羟基丙酸的电极在含有EDC、NHS的缓冲液中并置于恒温箱孵育,将3‑羟基丙酸的末端羧基转化为活性NHS酯;再取丝素蛋白特异性抗体溶液,滴涂至电极表面,烘干,用PBS缓冲液洗净未固定的抗体,得抗体石墨烯纳米ZnOAuNPs GCE修饰电极;随后,用BSA溶液封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点,取出后用PBS缓冲液洗净,晾干,得基于石墨烯纳米ZnOAuNPs的电化学传感器。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1中:氧化石墨烯的用量为20‑30mg,去离子水的用量为20‑30mL,超声1‑1.5h。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2具体为:将0.2mol CO(NH2)2与
0.1mol ZnCl2按2∶1加入盛有100mL去离子水‑无水乙醇溶液中溶解,加热升温至75‑80℃,同时匀速搅拌,反应1‑2h后,过滤洗涤,得到ZnCO3·2Zn(OH)2·H2O将ZnCO3·2Zn(OH)2·H2O在80‑85℃真空干燥箱中干燥1.5‑2h,然后置于马弗炉中以180‑220℃焙烧1.5‑2h,得到淡黄色的纳米ZnO粉末。
4.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,醇水体积之比为3∶1。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤3具体为:将0.5‑1mL的1wt%的氯金酸溶液加入20‑40mL去离子水,再加入0.1‑0.2mL 0.2mol/L的Na2CO3溶液,一边用搅拌器搅拌,一边分3次加入0.5‑1mL的0.5‑1mg/mL硼氢化钠溶液,直至溶液颜色变为酒红色,继续搅拌5‑10min后,结束反应,获得金纳米粒子溶液保存于4℃冰箱中备用。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤4中,超声6‑7h。
7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤5中,用无水乙醇浸泡超声清洗8‑
12min;用去离子水超声清洗8‑12min。
8.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤6具体为:取3‑5ul氧化石墨烯悬浮液垂直涂滴在GCE电极表面,35‑40℃恒温箱中烘干得到石墨烯修饰的GCE电极;继续涂滴3‑
5ul的纳米ZnOAuNPs复合物,35‑40℃恒温箱中烘干,制得石墨烯纳米ZnOAuNPsGCE电极。
9.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤7具体为:将电极置于0.04‑
0.06mol/L 3‑羟基丙酸水溶液,并于35‑37℃下恒温箱反应1.5‑2h;将修饰有3‑羟基丙酸的电极在含有0.04‑0.06mol/L EDC、0.02‑0.04mol/L NHS的缓冲液中并置于35‑37℃下恒温箱孵育0.5‑1h,将3‑羟基丙酸的末端羧基转化为活性NHS酯;再取3‑5ul 5‑10ug/mL丝素蛋白特异性抗体溶液,滴涂至电极表面,35‑37℃下恒温箱中烘干,用PBS缓冲液洗净未固定的抗体,得抗体石墨烯纳米ZnOAuNPs GCE修饰电极;随后,用BSA溶液封闭30‑40min,以封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点,取出后用PBS缓冲液洗净,晾干,得基于石墨烯纳米ZnOAuNPs的电化学传感器。
10.如权利要求9所述的制备方法,其特征在于,步骤7中,所述BSA溶液的浓度为0.8‑
1.2wt%。