1.一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于它按以下步骤实现：一、牛成肌细胞传代培养

将牛成肌细胞进行复苏培养，培养至70％‑80％细胞融合，进行传代培养；

二、配制转染试剂

取离心管A和B，A管添加50uL Opti‑MEM无血清培养基和1.5uLmiR‑18抑制剂预混；B管添加50uL Opti‑MEM无血清培养基和1uL RNAiMAX，静置5分钟后，把A管内的试剂混匀后加入B中，吹打3次，常温静置20min，得到转染试剂；

三、转染

牛成肌细胞传代培养至第三代，进行铺板传代，添加增殖培养基培养24h，然后换为分化培养基，再加入转染试剂进行转染，转染24h后用分化培养基更换1/2培养基，转染后培养

3‑7d，即完成利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法。

2.根据权利要求1所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于牛成肌细胞复苏培养的方法为：取冻存的牛成肌细胞，37度水浴摇晃融化，1000转速离心

5min后去除上清，用1mL增殖培养基重悬细胞，接种于6cm细胞培养皿中，补加增殖培养基至

3mL，置于37℃培养箱中培养。

3.根据权利要求2所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于增殖培养基配方：DMEM高糖细胞培养基+15％胎牛血清+10％马血清+1％双抗+1％谷氨酰胺替代物。

4.根据权利要求1所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于步骤一牛成肌细胞传代培养按照1:2传代。

5.根据权利要求1所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于步骤一的传代方法为：向装有牛成肌细胞的培养皿加入2mL PBS清洗，清洗2次，然后添加混合溶液A，置于37℃培养箱消化1min，加入1mL增殖培养基，吹打，收集细胞悬液到15mL离心管，1000转速离心5min后去除上清，添加1mL增殖培养基重新悬浮细胞沉淀，按照1:2的比例接种传代，每个6cm培养皿补齐增殖培养基到3mL，37℃、5％CO2培养箱中扩大培养；混合溶液A由200uL的胰酶和1mL的PBS混合而成。

6.根据权利要求1所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于步骤三铺板传代方法为：向传代至第三代的牛成肌细胞中加入2mL PBS清洗，清洗两次，然后添加混合溶液A，置于37℃培养箱消化1min，加入1mL增殖培养基吹打，收集细胞悬液到

15mL离心管，1000转速离心5min后去除上清，按照每孔传30000个细胞的数量传至24孔板，

24孔板全部铺满，每孔添加增殖培养基500uL，置于37℃5％CO2培养箱中继续培养；混合溶液A由200uL的胰酶和1mL的PBS混合而成。

7.根据权利要求6所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于步骤三采用24孔板进行转染时，每孔转染体系为：1.5μL miR‑18抑制剂，1μLRNAiMAX，100μL Opti‑MEM无血清培养基。

8.根据权利要求1所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于分化培养基为DMEM‑HIGH GLUCOSE培养基+2％马血清+1％双抗+1％谷氨酰胺替代物。

9.根据权利要求8所述的一种利用miR‑18抑制剂促牛成肌细胞分化的方法，其特征在于双抗为青霉素和链霉素的混合溶液。