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专利号: 2021107890841
申请人: 南京迈迪森亚生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-12-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种同时定量检测血清中3种急性心肌梗死相关microRNA荧光探针的制备方法,其特征在于,步骤如下:(1)、合成金属有机骨架Fe‑MIL‑88,其紫外可见吸收波长为400‑800 nm;所述金属有机骨架Fe‑MIL‑88的合成步骤如下:将1 ,4‑二羧基苯,六水合氯化铁与N,N‑二甲基甲酰胺混合,然后加入乙酸,在120℃下反应4h,离心后获得的产物分别用N,N‑二甲基甲酰胺、乙醇和水洗涤;

(2)、制备荧光发夹探针H1,H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H9:将H1‑H9于95 ℃反应,然后自然冷却至室温;其中,所述发夹探针H1‑H3标记FAM,所述发夹探针H4‑H6标记TAMRA,所述发夹探针H7‑H9标记Cy5,其中,H1的序列为:TCGTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTATGATCAGATCGTTAGCTTATCAGACTG;

H2的序列为:CAGTCTGATAAGCTAACGATCTGATCACTGATGTTGAAATGATCAGATCGTTAG;

H3的序列为:CTAACGATCTGATCGTTTCAACATCAGTAGCTTATCAGACTGATGTTGAAACGA;

H4的序列为:TAMRA‑TCGTTAAACATCACTGCAAGTCTTAAGAATCAGATCGTTTAAGACTTGCAGT;

H5的序列为:TAMRA‑ACTGCAAGTCTTAAACGATCTGATTCGTGATGTTTAACGAATCAGATCGTTT;

H6的序列为:TAMRA‑AAACGATCTGATTCGTTAAACATCACTTAAGACTTGCAGTGATGTTTAACGA;

H7的序列为:Cy5‑TCGTTATTTGGTTCCATTTTACCAGCTCGATCAGATCGTAGCTGGTAAAATGGA;

H8的序列为:Cy5‑TCCATTTTACCAGCTACGATCTGATCGGGAACCAAATAACGATCAGATCGTAGC;

H9的序列为:Cy5‑GCTACGATCTGATCGTTATTTGGTTCCAGCTGGTAAAATGGAACCAAATAACGA;

所述3种急性心肌梗死相关microRNA为 microRNA‑21、microRNA‑499和microRNA‑

133a,所述H1‑H3用于检测microRNA‑21、所述H4‑H5用于检测microRNA‑499;所述H7‑H9用于检测microRNA‑133a;

(3)、制备荧光淬灭探针:将步骤(2)所得的发夹探针与步骤(1)所得的Fe‑MIL‑88混合,Fe‑MIL‑88浓度为175‑525 μg/mL,发夹探针与Fe‑MIL‑88培育时间为0‑40 min且大于0, 

520 nm处FAM的荧光随着目标物microRNA‑21浓度逐渐增加而逐渐增强,580 nm处TAMRA的荧光随着目标物microRNA‑499浓度逐渐增加而逐渐增强,680 nm处Cy5的荧光随着目标物microRNA‑133a浓度逐渐增加而逐渐增强;目标物与发夹探针培育时间为0‑120 min且大于

0;

(4)、根据荧光强度对相应目标物的浓度绘制标准曲线;根据520 nm处荧光强度对microRNA‑21的浓度绘制标准曲线,根据580 nm处荧光强度对microRNA‑499的浓度绘制标准曲线,根据680 nm处荧光强度对microRNA‑133a的浓度绘制标准曲线;

(5)、根据标准曲线,获得样品中microRNA‑21,microRNA‑499,microRNA‑133a的浓度,完成对3种microRNA的定量检测。