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专利号: 2021104575332
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-12
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种用于纯化IgG抗体的聚合物微球,其特征在于所述聚合物微球是以聚乙烯醇和海藻酸钠为原料,加入水在80‑100℃溶解后,降温至40℃后加入含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌菌液制成水相;再将液体石蜡和表面活性剂混合为油相,水相缓慢滴加到油相中,

30‑70℃搅拌形成乳液后,再加入饱和硼酸氯化钙水溶液,搅拌制备得到所述的聚合物微球;所述表面活性剂为span80;所述ZZ融合蛋白是将ZZ蛋白通过连接肽与锚定蛋白LppOmpA融合而成。

2.如权利要求1所述的聚合物微球,其特征在于所述ZZ蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,连接肽氨基酸序列为GIPG;所述锚定蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.3。

3.如权利要求1所述的聚合物微球,其特征在于ZZ融合蛋白编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。

4.如权利要求1所述的聚合物微球,其特征在于所述含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌是将ZZ蛋白通过连接肽与锚定蛋白LppOmpA融合后的基因,用NcoI和HindIII限制性内切酶,转入载体pET28a,构建pET28a‑LppOmpA‑ZZ质粒,转化E.coli BL21(DE3)制备得到。

5.如权利要求1所述的聚合物微球,其特征在于所述含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌菌液按如下方法制备:将含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌均匀涂布在含有50μg/mL卡那霉素的LB平板上,在30℃下放置培养过夜;从LB平板上挑取单菌落,以体积浓度1%的接种量接种于含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃,180rpm摇床培养过夜至OD600为

0.62,获得所述的菌液。

6.如权利要求1所述的聚合物微球,其特征在于所述海藻酸钠与聚乙烯醇质量比为1:

6,所述水体积用量以海藻酸钠质量计为90‑100mL/g;所述重组大肠杆菌菌液以湿菌体重量计,则湿菌体加入量与海藻酸钠质量比为1‑5:100;所述液体石蜡与表面活性剂体积比为

10‑30:1.5;所述油相与水相体积比为10‑30:20,所述油相与饱和硼酸氯化钙水溶液体积比为20‑60:21.5。

7.如权利要求1所述的聚合物微球,其特征在于所述聚合物微球按如下方法制备:(1)将聚乙烯醇,海藻酸钠和双蒸水,在95℃条件下搅拌至溶液澄清透明,得到PVA/SA混合溶液;冷却至40℃后加入重组大肠杆菌菌液,在常温下均匀搅拌30min,获得菌体混合液,即为水相;

(2)将液体石蜡和表面活性剂在300r/min转速机械搅拌30min后作为油相;向油相逐滴缓慢加入步骤(1)水相,在50℃、500r/min条件下水浴搅拌1h,形成白色乳液,边搅拌边降温,待温度降至40℃时快速加入饱和硼酸氯化钙水溶液,40℃、100r/min水浴加热搅拌反应

2h,采用50‑65目的筛网过滤,滤液与异丙醇混合后离心,沉淀用蒸馏水清洗3‑5次,获得所述的聚合物微球。

8.如权利要求7所述的聚合物微球,其特征在于饱和硼酸氯化钙水溶液滴加速度40mL/

5s。

9.一种权利要求1所述聚合物微球在制备抗体纯化填料中的应用。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述抗体包括IgG抗体。