1. 一种猪带绦虫Ts14‑3‑3.3 DNA疫苗制备及鉴定方法,其特征是,包含以下步骤:
1)采用PAS法,全基因合成Ts14‑3‑3.3和sp‑Ts14‑3‑3.3抗原编码基因;
2)分别将目的基因克隆至真核表达载体pMZ‑X3,转入Top10克隆菌株,挑取阳性克隆子测序鉴定和双酶切鉴定重组质粒pMZ‑X3‑Ts14‑3‑3.3和pMZ‑X3‑sp‑Ts14‑3‑3.3;
3)随后制备两种转染级别质粒,并分别转染人293F胚肾细胞,采用Western blot法鉴定;
4)然后将84只雌性Balb/c小鼠随机分成4组,分别为pMZ‑X3‑Ts14‑3‑3.3疫苗组,pMZ‑X3‑sp‑Ts14‑3‑3.3疫苗组,pMZ‑X3空质粒对照组,PBS空白对照组;
5)于首次免疫后0w、2w、4w、6w、8w收集小鼠血清和脾淋巴细胞进行鉴定:①采用间接ELISA法检测血清中特异性IgG及其IgG1和IgG2a亚类水平;
②采用CCK‑8法检测脾淋巴细胞增殖水平;
③采用流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群比例;
④采用双抗夹心ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IFN‑γ、IL‑2、IL‑4、IL‑10水平。