1.一种利用起皱假单胞菌株Ⅱ型合酶生产PHA方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)挑取在LB琼脂培养基上30℃温度下培养12h的起皱假单胞菌单菌落接种于10mlLB培养基中,在30℃,200rpm,摇床培育8‑12h,作为种子液;
2)将种子液以5%接种量接种于矿物盐发酵培养基,在30℃,200rpm条件下,摇床培养
72h;
3)培养结束后,洗涤、收集菌体;
4)将得到的湿细胞在‑20℃冰箱中冷冻过夜,干燥到细胞恒重。
2.根据权利要求1所述的一种利用起皱假单胞菌株Ⅱ型合酶生产PHA方法,其特征在于,LB培养基的制备方法如下:取5g/l酵母提取物、10g/l胰蛋白胨、10g/lNaCl,分装后在
121℃灭菌15‑20min。
3.根据权利要求2所述的一种利用起皱假单胞菌株Ⅱ型合酶生产PHA方法,其特征在于,所述的LB琼脂培养基的制备方法如下:取5g/l酵母提取物、10g/l胰蛋白胨、10g/lNaCl,加入15g/l的琼脂粉,分装后在121℃灭15‑20min。
4.根据权利要求3所述的一种利用起皱假单胞菌株Ⅱ型合酶生产PHA方法,其特征在于,所述的矿物盐发酵培养基,由组分I、组分II、组分III和组分IV组成;
所述的组分I为:十二水磷酸氢二钠180g/l、磷酸氢二钾30g/l;
所述的组分II为:硫酸铵1g/l、硫酸镁0.41g/l;
所述的组分III为:柠檬酸铁铵(17%)5g/l、氯化钙2g/l;
所述的组分IV为:氯化镍20mg/l、硫酸铜10mg/l、钼酸钠30mg/l、氯化锰30mg/l、氯化钴
200mg/l、硫酸锌100mg/l、硼酸300mg/l。
5.根据权利要求4所述的一种利用起皱假单胞菌株Ⅱ型合酶生产PHA方法,其特征在于,步骤3)具体为培养结束后,8000rpm离心10min收集菌体,蒸馏水洗菌体沉淀,8000rpm,离心10min收集菌体,再用95%乙醇洗涤菌体,8000rpm,离心10min收集菌体。
6.根据权利要求5所述的一种利用起皱假单胞菌株Ⅱ型合酶生产PHA方法,其特征在于,所述的矿物盐发酵培养基中含有碳源,所述的碳源是甘油、月桂酸、葡萄糖酸钠、果糖、油酸钠中的一种。