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专利号: 2021101127283
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以表达D‑氨基酸氧化酶的重组大肠杆菌为生产菌株,活化后扩大培养,得到种子液;

(2)将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养,当溶解氧下降到1%以后采用DO‑STAT模式分批补料,DO设定值为10%~50%;发酵过程中添加10g/L‑50g/L的乳糖作为诱导剂,同时添加D‑氨基酸至发酵液中,继续培养至发酵结束,收集胞内含有D‑氨基酸氧化酶的菌体。

2.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述扩大培养包括:将活化后的生产菌株接种于一级种子培养基中,一级种子培养基组成为:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,NaCl 10g/L,37℃振荡培养得到一级种子液,再将一级种子液按

1%的接种量接种于二级种子培养基中,二级种子培养基组成为:蛋白胨12g/L,酵母粉24g/L,甘油5g/L,KH2PO4 2.31g/L,K2HPO4·3H2O 12.54g/L,37℃振荡培养得到二级种子液。

3.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述发酵培养基的组成为:蛋白胨15g/L,酵母粉12g/L,NaCl 10g/L,(NH4)2SO4 5g/L,K2HPO4·

3H2O 2.28g/L,KH2PO4 1.36g/L,MgSO4·7H2O 0.375g/L,甘油12g/L,消泡剂1mL/L。

4.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,补料采用的培养基组成是:甘油500g/L,蛋白胨75g/L,酵母粉50g/L,MgSO4·7H2O 5g/L,(NH4)2SO4 20g/L,KH2PO4 3g/L,K2HPO4 3g/L,NaCl 5g/L。

5.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,所述DO‑STAT模式为当DO超出设定值的0.1%时开始补料,DO设定值为30%。

6.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,步骤(2)中,将种子液按10%的接种量接种于发酵培养基,37℃培养5~6h,将温度调至28℃,并添加乳糖作为诱导剂。

7.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,发酵体系中添加乳糖的浓度为15g/L~20g/L。

8.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,步骤(2)中,发酵培养至OD600为18~20时,将温度调至28~30℃,并添加15g/L~20g/L的乳糖作为诱导剂;培养至OD600为42~45时,添加12.5g/L~20g/L的乳糖进行第二次诱导。

9.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,在添加乳糖的同时添加1g/L~2g/L的D‑氨基酸至发酵液中。

10.如权利要求1所述的发酵生产D‑氨基酸氧化酶的方法,其特征在于,所述D‑氨基酸为D‑丙氨酸、D‑谷氨酸或D‑蛋氨酸。