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专利号: 2021100662647
申请人: 南昌大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖,其特征在于:该肠球菌胞外多糖为海氏肠球菌胞外多糖,由海氏肠球菌WEHI01菌株发酵产生,所述海氏肠球菌WEHI01于2019年1月

21日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO:M 2019068。

2.根据权利要求1所述的肠球菌胞外多糖,其特征在于:所述海氏肠球菌胞外多糖包括四种组分:EPS‑I01、EPS‑I02、EPS‑I03和EPS‑I04,海氏肠球菌胞外多糖的组分EPS‑I02由鼠李糖、海藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,且摩尔比为1:1.76:5.48:4

1.76:2.52:6.2:20.92,分子量为2.28×10Da。

3.根据权利要求2所述的肠球菌胞外多糖,其特征在于:所述海氏肠球菌胞外多糖的组分EPS‑I02增强小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7的吞噬能力,同时刺激RAW264.7细胞分泌NO、TNF‑α和IL‑6因子。

4.一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖的制备方法,包括肠球菌胞外多糖的制备和肠球菌胞外多糖的分离纯化,其特征在于:所述肠球菌胞外多糖的制备包括以下步骤:(1)将海氏肠球菌WEHI01的种子液以体积比1.0~4.0%的接种量接种于无菌脑心浸液肉汤培养基中,于37℃厌氧培养10~25h,获得发酵液;

(2)将步骤(1)获得的发酵液于4℃,7000~9000×g离心5min,去除菌体,获得发酵上清液;

(3)向步骤(2)获得的发酵上清液中加入2~4倍体积的无水乙醇,置于4℃冰箱中醇沉

48~72h,4℃条件下,10000×g离心20min,收集沉淀物,并将沉淀物溶于水,用截留分子量为8000~14000Da的透析袋于4℃条件透析3天,期间每天换两次水,透析后的样品进行冷冻干燥,获得肠球菌胞外多糖粗提物;

(4)将步骤(3)获得的肠球菌胞外多糖粗提物复溶后,加入1/3~1/5体积的Sevag液,剧烈震荡后,9000×g离心5min,取上层水相,多次重复上述操作,获得的粗胞外多糖溶液,置于4℃条件透析3~5天后,冷冻干燥,获得肠球菌胞外多糖粗品。

5.根据权利要求4所述的一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述接种量为1.0%,所述发酵时间为15h;步骤(2)中所述发酵液于4℃,

8000~9000×g离心5min;步骤(3)中所述无水乙醇加入体积为3~4倍;步骤(4)中加入1/5体积的Sevag液,所述Sevag液中氯仿:正丁醇的体积比为4:1,透析时间为3~4天。

6.根据权利要求4所述的一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖的制备方法,其特征在于:所述肠球菌胞外多糖的分离纯化包括以下步骤:(1)用阴离子交换层析柱对所述肠球菌胞外多糖粗品进行分离纯化,以0、0.5、0.7、

1mol/L NaCl溶液进行分段洗脱分离,洗脱速度为1~2mL/min,0.5mol/L NaCl溶液洗脱得到海氏肠球菌胞外多糖的组分EPS‑I02,合并收集组分峰的洗脱产物,装入截留分子量为

8000~14000Da的透析袋中,4℃条件下,在去离子水中透析24~72h,每隔4~12h换水一次,最后真空冷冻干燥;

(2)再采用凝胶过滤层析柱进一步纯化,以0.2mol/L的NH4HCO3溶液洗脱,洗脱速度为

0.5~1.5mL/min,合并收集组分峰的洗脱产物,反复加水减压蒸干除去NH4HCO3后,最后真空冷冻干燥。

7.根据权利要求6所述的一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖及其制备方法,其特征在于:步骤(1)中采用5mL的HiTrap Q Sepharose High Performance阴离子交换层析柱,洗脱速度为1mL/min,透析48h,每隔4h换水一次。

8.根据权利要求6所述的一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖及其制备方法,其特征在于:步骤(2)中采用10mm×300mm的Superdex G 200凝胶过滤层析柱,洗脱速度为

0.5mL/min。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的一种具有免疫调节作用的肠球菌胞外多糖应用于食品、医药。