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专利号: 2020115914152
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法,其特征在于,包含以下操作步骤:(1)取藻粉,加入PBS缓冲液,冷冻,融解,反复冷冻、融解,超声裂解藻体,得到藻细胞破碎液,离心所得藻细胞破碎液,取上清液,用硫酸铵在过夜盐析至饱和度,离心,收集沉淀获得粗蛋白,向粗蛋白中加入PBS缓冲液溶解粗蛋白,透析脱盐后真空冷冻干燥,得到富硒螺旋藻总蛋白粉末;

(2)称取步骤(1)所得富硒螺旋藻总蛋白粉末至PBS缓冲液,溶解,超声促溶后离心,再过滤上清液,收集滤液获得富硒螺旋藻蛋白溶液;

(3)选择弱阴离子DEAE作为离子交换剂,用PBS缓冲液平衡层析柱,将40mL3.0mg/mL富硒螺旋藻蛋白溶液上柱,先用PBS缓冲液洗脱结合柱子,再依次分别用0.12M、0.2M、0.4M、

0.6M、0.8M的NaCl‑PBS缓冲液梯度洗脱分离样品,以洗脱体积为横坐标,波长280nm处吸光度为纵坐标,绘制蛋白洗脱曲线,收集同一个NaCl‑PBS缓冲液洗脱梯度的样品作为一个组份,即0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl‑PBS分别对应Se‑SP1,Se‑SP1,2,Se‑SP3,Se‑SP4,Se‑SP5,即可分离出5个蛋白组,浓缩、透析脱盐,真空冷冻干燥,得到纯化的含硒蛋白组份;

其中,步骤(1)中所述的冷冻温度为‑20℃,时间为3h;所述超声裂解时间为30min;所述离心皆为10000rpm、4℃离心30min;所述PBS缓冲液的摩尔浓度为0.1M,内含2%聚乙烯吡咯烷酮和0.5%二硫苏糖醇,pH值为6.8;

其中,步骤(2)中所述离心转速≥8000rpm,4℃离心20min;

其中,步骤(2)、步骤(3)中所述PBS缓冲液皆为同一规格,所述PBS缓冲液浓度为50mM,pH为7.0,不含有2%聚乙烯吡咯烷酮和0.5%二硫苏糖醇。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中5g藻粉加入100mLPBS缓冲液。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中冷冻干燥时间为36h,温度‑25℃。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中0.2g富硒螺旋藻总蛋白粉末加入50mLPBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中4℃下充分溶解30min,超声促溶

5min。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中所述梯度洗脱分离样品的流速

1mL/min。