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专利号: 2020114786496
申请人: 安徽工程大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种类异戊二烯转移酶ComQ突变体,其特征在于,所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8所示。

2.一种编码权利要求1所述类异戊二烯转移酶ComQ突变体的基因。

3.根据权利要求2所述的基因,其特征在于,所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7所示。

4.一种含权利要求2或3所述基因的表达载体。

5.一种含权利要求2或3所述基因的工程菌。

6.根据权利要求5所述基因的工程菌,其特征在于,出发菌株为Bacillus subtilis 

168,外源comQ基因来自Bacillus subtilis natto。

7.根据权利要求1所述类异戊二烯转移酶ComQ突变体的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤:

步骤一,同源重组敲除Bacillus subtilis 168中comQ基因得到△comQ菌株;

步骤二,PCR扩增编码来自Bacillus subtilis natto的类异戊二烯转移酶突变体基因;将所得PCR产物连接表达载体pHY‑P43得到重组质粒pHY‑comQ;

步骤三,采用DpnI法点突变,根据待突变的氨基酸位点来设计PCR点突变引物,以重组质粒pHY‑comQ为模板,通过PCR扩增出产物,经转化处理得到的重组质粒pHY‑comQ'再转入D95R D96H D99A D215K△comQ菌株,得到待表达的突变株ComQ 、ComQ 、ComQ 和ComQ 。

8.根据权利要求7所述类异戊二烯转移酶ComQ突变体的制备方法,其特征在于,所述步骤一中得到△comQ菌株的方法包括如下步骤:A1,将Bacillus subtilis 168原始菌培养至指数生长中期,提取全基因组DNA;

A2,将含有P7C6质粒的大肠杆菌JM109培养至指数生长中期,提取P7C6质粒;

A3,以Bacillus subtilis 168全基因组DNA作为左、右同源臂的模板;P7C6质粒DNA作为中间片段的模板,设计特异性引物进行PCR扩增,扩增产物融合纯化后,化学转化到Bacillus subtilis 168感受态细胞中,得到△comQ菌株。

9.根据权利要求7所述类异戊二烯转移酶ComQ突变体的制备方法,其特征在于,所述步骤三中转化处理得到的重组质粒pHY‑comQ'再转入△comQ菌株的方法是将PCR产物用DpnI酶在37℃处理3h,去除模板DNA,消化产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,得到相关突变株的转化子,经提取质粒,测序验证后,将comQ相应位点已成功突变的重组质粒pHY‑comQ'转入△comQ菌株。

10.根据权利要求1所述类异戊二烯转移酶ComQ突变体在合成维生素K2和纳豆激酶中的应用。