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专利号: 2020113012110
申请人: 福建师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-12-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)改性Au@Au球形核壳结构的制备:带普鲁士蓝内标的Au@Au NPs溶液活化后修饰上用于识别IL‑6的IL‑6抗体,得到改性Au@Au球形纳米粒子;

2)捕获IL‑6的SERS二维基底的制备:将修饰有氨基的玻璃片没入Ag NPs胶体中,浸泡

24h后取出,用超纯水冲去多余Ag NPs胶体,得到二维银片基底;利用Ag‑S键的连接将4‑MPBA固载在银膜上,再用乙醇冲去未修饰的4‑MPBA,最后再用PBS冲洗,得到捕获IL‑6的SERS二维基底;

3)IL‑6标准样品的检测:将不同浓度的IL‑6标准溶液与二维SERS基底充分接触1h,PBS溶液冲洗后,加入100μL 0.2%BSA溶液反应20min;而后加入修饰有IL‑6抗体的改性Au@Au球形核壳结构共孵育1h后,用PBS溶液洗去未结合上目标分子IL‑6的SERS探针,自然干燥后进行SERS检测,建立工作曲线和进行成像检测;

4)血液样品中IL‑6的检测:选用白血病患者的血液,离心除去大分子物质;加入浓度为

5‑25μg/mL的IL‑6旋转30min达到完全混合,得到IL‑6血液样品溶液;检测过程与步骤(3)中IL‑6标准溶液检测步骤相同,测得血液样品中IL‑6拉曼光谱,带入步骤(3)获得的标准曲线进行计算,求出血液样品中IL‑6浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,步骤‑5 ‑6 ‑7 ‑8 ‑9

1)具体步骤如下:将2mL的Au@Au NPs胶体加入等体积浓度分别为10 、10 、10 、10 、10 M的SH‑PEG‑COOH溶液中,在核壳结构表面修饰上‑COOH;离心洗涤后得到Au@Au@COOH NPs,活化‑COOH以便于修饰抗体;活化好的Au@Au NPs加入5ng/mL的IL‑6抗体,反应1h,4℃下孵育

24h,离心洗涤后重分散在PBS溶液中,得到改性的Au@Au球形纳米粒子。

3.根据权利要求2所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,Au@Au NPs核壳胶体溶液制备方法如下:将2mL的Au NPs胶体中加入浓度为0.5mmol/L的K3[Fe(CN)6]的水溶液,用于刻蚀Au NPs纳米颗粒表面;均速将浓度均为0.1mmol/L的0.2‑2mL的K4[Fe(CN)6]和等量的FeCl3·6H2O同时滴入刻蚀好的Au NPs胶体溶液中,生成普鲁士蓝;Au@PB纳米粒子溶液离心洗涤后重新分散到超纯水中,浓缩10倍体积后加入1%柠檬酸三钠溶液反应30min,加热至沸,按10:1的体积比加入对应量的1mmol/L HAuCl4溶液反应1h,得到蓝紫色Au@Au NPs纳米胶体,离心洗涤备用。

4.根据权利要求3所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,Au NPs胶体溶液制备方法如下:99mL水中加入1mL 1%质量百分比的HAuCl4溶液,加热至沸后加入1mL 1%柠檬酸三钠溶液,剧烈搅拌下继续沸腾15min直至还原反应完全,得到酒红色Au NPs纳米胶体,离心洗涤备用。

5.根据权利要求2所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,活化‑COOH的方法如下:在Au@Au@COOH NPs中加入20μL,34mmol/L的EDC和17mmol/L的NHS溶液,反应30min,离心后备用。

6.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,步骤

2)中修饰有氨基的玻璃片制备方法如下:将玻璃片浸泡于无水乙醇超声后干燥处理,除去玻璃片表面残留的油渍和有机物;再将玻璃片与“食人鱼”溶液进行反应,反应后用乙醇和水冲洗后得到修饰大量‑OH基团的玻璃片;再将玻璃片浸没于体积百分比10%3‑氨丙基三乙氧基硅烷的醇水溶液中,反应24h后,用水和乙醇反复冲洗,在110℃下进行30min的缩合反应,玻璃片浸泡在超纯水中备用。

7.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于,步骤

2)中Ag NPs胶体制备方法如下:100mL水中加入18mg AgNO3,加热至沸,立即加入10mL1%柠檬酸三钠,继续反应1h得到灰绿色Ag NPs纳米胶体,离心洗涤后备用。

8.根据权利要求6所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于:食人鱼为体积比为3:7的过氧化氢与浓硫酸。

9.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于:步骤

3)的工作曲线为y=296.81x+3872.74。

10.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测血液中IL‑6的方法,其特征在于:IL‑

6的检测范围为0.5‑50000pg/mL。