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专利号: 2020111663121
申请人: 淮阴师范学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-01
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.用于乌苏里拟鲿性别检测的多重PCR引物及检测方法,其特征在于:多重PCR引物所在核苷酸序列为SEQ ID NO:1-3。

2.一种能扩增出SEQ ID NO:1-3中至少一条序列的多重PCR引物组。

3.根据权利要求2所述的引物组,其特征在于:所述引物组的序列为

SEQ4: 5'-CAGTAACGGGTATCGTCCAA -3'SEQ5: 5'-TTTCTATTCACACTACGGGCT -3'SEQ6: 5'-GTGAGTTGCCCTGAGGTCTT -3'SEQ7: 5'-CTGACATCGGTGCTTGACTT -3'SEQ8: 5'-GAAGTCAATGTTCCCTGTT -3'SEQ9: 5'-TTCTCAACCACGAACTCTT -3'。

4.乌苏里拟鲿性别鉴定多重PCR引物试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包含权利要求2或3所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒还包括PCR技术的常用试剂。

6.权利要求1所述的多重PCR引物、权利要求2或3所述的引物组、权利要求4或5所述的试剂盒在乌苏里拟鲿性别鉴定中的应用。

7.用于乌苏里拟鲿性别检测的多重PCR引物及检测方法,其特征在于:包括如下步骤:S1.DNA提取:抽提目标个体的基因组DNA;

S2.多重PCR 扩增:采用权利要求2或3所述的引物组,以S1获得的目标个体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得目标个体多重PCR扩增产物;

S3.扩增产物电泳检测:采用琼脂糖凝胶电泳及GoldView染色法检测S2获得的多重PCR扩增产物;

S4.性别鉴定:根据每个个体多重PCR扩增产物的有无进行性别鉴定,某一个体在246 bp、597 bp和823 bp处均无扩增条带,则该个体为雌性;若某一个体在三处中至少一处有扩增条带,则该个体为雄性。

8.根据权利要求7所述的用于乌苏里拟鲿性别检测的多重PCR引物及检测方法,其特征在于:所述PCR扩增的反应体系:总体积13-25 µL,包含60-80 ng的模板DNA(约0.8-1.5 µL),1 U Taq DNA聚合酶(0.1-0.2 µL),1.3-2.5 µL 10×PCR Buffer,0.4-1 µL dNTP (2.5 mM),SEQ4、SEQ5引物各0.3-0.5 µL,SEQ6、SEQ7引物各0.2-0.4 µL,SEQ8、SEQ9引物各0.4-

0.6 µL(各引物浓度为2.5 µM),灭菌超纯水9-18 µL;所述PCR扩增的程序为:94°C预变性5-

7分钟;94°C变性35-45秒、65°C→50°C退火35-45秒、72°C延伸40秒-1分钟,每个循环退火温度降低1°C,运行15-17个循环;94°C变性35-45秒,50°C退火35-45秒,72°C延伸40-50秒,运行18-22个循环;最后72°C终延伸8-15分钟,PCR产物于4°C保存。

9.根据权利要求7所述的用于乌苏里拟鲿性别检测的多重PCR引物及检测方法,其特征在于:所述S3的详细过程为:将多重PCR扩增产物在已加入GoldView染色剂的1%-2%琼脂糖凝胶中,150-200V恒定电压下电泳15-30分钟进行分离。