1.一种能扩增出SEQ ID NO:1‑3中至少一条序列的多重PCR引物组。
2.根据权利要求1所述的引物组,其特征在于:所述引物组的序列为
SEQ4: 5'‑CAGTAACGGGTATCGTCCAA ‑3'SEQ5: 5'‑TTTCTATTCACACTACGGGCT ‑3'SEQ6: 5'‑GTGAGTTGCCCTGAGGTCTT ‑3'SEQ7: 5'‑CTGACATCGGTGCTTGACTT ‑3'SEQ8: 5'‑GAAGTCAATGTTCCCTGTT ‑3'SEQ9: 5'‑TTCTCAACCACGAACTCTT ‑3'。
3.乌苏里拟鲿性别鉴定多重PCR引物试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包含权利要求1或2所述的引物组。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒还包括PCR技术的常用试剂。
5.多重PCR引物用于乌苏里拟鲿性别检测的方法,其特征在于:包括如下步骤:S1.DNA提取:抽提目标个体的基因组DNA;
S2.多重PCR 扩增:采用权利要求2所述的引物组,以S1获得的目标个体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得目标个体多重PCR扩增产物;
S3.扩增产物电泳检测:采用琼脂糖凝胶电泳及GoldView染色法检测S2获得的多重PCR扩增产物;
S4.性别鉴定:根据每个个体多重PCR扩增产物的有无进行性别鉴定,某一个体在246 bp、597 bp和823 bp处均无扩增条带,则该个体为雌性;若某一个体在三处中至少一处有扩增条带,则该个体为雄性。
6.根据权利要求5所述的多重PCR引物用于乌苏里拟鲿性别检测的方法,其特征在于:所述PCR扩增的反应体系:总体积13‑25 µL,包含60‑80 ng的模板DNA 0.8‑1.5 µL,1 U Taq DNA聚合酶0.1‑0.2 µL,1.3‑2.5 µL 10×PCR Buffer,0.4‑1 µL dNTP 2.5mM,SEQ4、SEQ5引物各0.3‑0.5 µL,SEQ6、SEQ7引物各0.2‑0.4 µL,SEQ8、SEQ9引物各0.4‑0.6 µL,各引物浓度为2.5 µM,和灭菌超纯水;所述PCR扩增的程序为:94°C预变性5‑7分钟;94°C变性35‑45秒、
65°C→50°C退火35‑45秒、72°C延伸40秒‑1分钟,每个循环退火温度降低1°C,运行15‑16个循环;94°C变性35‑45秒,50°C退火35‑45秒,72°C延伸40‑50秒,运行18‑22个循环;最后72°C终延伸8‑15分钟,PCR产物于4°C保存。
7.根据权利要求5所述的多重PCR引物用于乌苏里拟鲿性别检测的方法,其特征在于:所述S3的详细过程为:将多重PCR扩增产物在已加入GoldView染色剂的1%‑2%琼脂糖凝胶中,150‑200 V恒定电压下电泳15‑30分钟进行分离。