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专利号: 2020109965212
申请人: 浙大宁波理工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)构建表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的纤维二糖水解酶的重组工程菌,诱导表达获得纤维二糖水解酶;

(2)以纤维二糖水解酶为催化剂,以淫羊藿苷为底物进行转化反应,反应结束后将反应液分离纯化,制得淫羊藿次苷Ⅱ。

2.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,所述重组工程菌的宿主细胞为大肠杆菌细胞。

3.如权利要求2所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,所述纤维二糖水解酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求2所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,将活化后的重组工程菌接种于含有抗生素的LB培养基中,培养至OD600值为0.6~1,加入1~3g/L的乳糖或0.1~0.4mmol/L的IPTG,诱导结束后离心收集菌体,制备粗酶液,利用粗酶液进行转化反应。

5.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,反应体系中,以0.2M磷酸钠缓冲液或0.2M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为反应介质,以控制反应体系pH值=6~7。

6.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,酶的添加量以湿菌体计为3~10mg/mL,底物初始浓度为30~100μg/mL。

7.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,采用甲醇或二甲基亚砜溶解淫羊藿苷后,再加入到反应体系中,反应体系中甲醇或二甲基亚砜的体积百分比浓度为1%~10%。

8.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,转化反应的温度为40~50℃。

9.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法,其特征在于,所述分离纯化包括:反应液用等体积的乙酸乙酯萃取,收集有机相,有机相依次经饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥,最后旋蒸去除乙酸乙酯,得到淫羊藿次苷Ⅱ。