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专利号: 202010902959X
申请人: 湖南工程学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于三链DNA结构的多维立体网状杂交链式信号放大的检测EB病毒的序列组合,其特征在于,包括微球修饰探针、核酶序列1、核酶序列2、杂交链式反应发夹探针1、杂交链式反应发夹探针2、第三链杂交链式反应引发探针、第三链杂交探针和荧光探针;

所述微球修饰探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;

所述核酶序列1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;

所述核酶序列2的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示;

所述杂交链式反应发夹探针1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示;

所述杂交链式反应发夹探针2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示;

所述第三链杂交链式反应引发探针的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示;

所述荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示,所述荧光探针的3’端有石墨烯量子点;

所述第三链杂交探针的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

2.一种非诊断目的地利用权利要求1所述的序列组合检测EB病毒的方法,包括以下步骤:

1)将所述微球修饰探针固定在微球上、封闭,得到功能化微球,将所述功能化微球固定7

在芯片上,得到含有修饰探针的芯片;所述功能化微球的表面修饰3×10 个生物素化的分子;所述封闭的温度为37℃,所述封闭的时间为1h;

2)将所述核酶序列1和核酶序列2固定到步骤1)得到的含有修饰探针的芯片上,得到捕获EB病毒的芯片;所述固定的温度为37℃,所述固定的时间为5min;

3)将所述步骤2)得到的捕获EB病毒的芯片与待检测物、所述杂交链式反应发夹探针1、所述杂交链式反应发夹探针2进行反应,得到含有第一双链DNA纳米线的芯片;所述反应的温度为37℃,所述反应的时间为60min;

4)将所述步骤3)得到的含有第一双链DNA纳米线的芯片与第三链杂交链式反应引发探针、第三链杂交探针、杂交链式反应发夹探针1、杂交链式反应发夹探针2进行反应,得到含有第二双链DNA纳米线的芯片;所述反应的温度为30℃,所述反应的时间为120min;

5)将所述步骤4)得到的含有第二双链DNA纳米线的芯片与荧光探针进行反应,得到检测芯片,对所述检测芯片的微球表面荧光强度进行测算,将测算结果代入检测曲线F荧光强度=

4.361+0.112CEB病毒DNA中,得到待检测物中EB病毒含量;所述反应的温度为25℃,所述反应的时间为15min。