利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020107990385
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种海洋细菌(Microbacterium oleivorans)40DY182,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏日期2018年7月13日,保藏编号GDMCC No:60414,地址:广州市先烈中路100号大院59号楼5楼,广东省微生物研究所,邮编510075。

2.一种权利要求1所述海洋细菌40DY182在制备去甲哈尔满中的应用,其特征在于式(Ⅰ)所示去甲哈尔满按如下方法制备:

(1)将海洋细菌(Microbacterium oleivorans)GDMCC No:60414经发酵培养获得的发酵液过滤除去菌体,滤液加入等体积的乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯相减压浓缩至干,得到粗提物;

(2)将步骤(1)粗提物利用高效液相制备色谱分离,选择甲醇‑水作为洗脱溶剂,0~

30min从10%到100%线性梯度增加甲醇,分别收集0‑6min、6‑12min、12‑16min、16‑20min、

20‑25min、25‑30min流出液,得到6个馏分,分别标记为流出液A、流出液B、流出液C、流出液D、流出液E、流出液F;

(3)取步骤(2)流出液E利用高效液相制备色谱分离,选择甲醇‑水作为洗脱溶剂,0~

30min从30%到100%线性梯度增加甲醇,分别收集0‑7min、7‑14min、14‑18min、18‑25min、

25‑30min流出液,得到5个馏分,分别标记为流出液A1、流出液B1、流出液C1、流出液D1、流出液E1;

(4)取步骤(3)流出液A1利用高效液相制备色谱进一步纯化,选择甲醇‑水作为洗脱溶剂,0~135min从20%到100%线性梯度增加甲醇浓度,收集22min出现的峰,并浓缩至干,得到式(Ⅰ)所示化合物;

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤(2)高效液相制备色谱柱:Phenomenex USA,Luna 10μm C18,250*21.2mm;流动相:甲醇‑水;流速:5mL/min;检测波长:210nm;进样量1mL,粗提取物的浓度100mg/mL。

4.如权利要求2所述的应用,其特征在于步骤(3)高效液相制备色谱柱:Agilent Eclipse XDB‑C18 5μm 250*9.4mm;流动相:甲醇‑水;流速:2mL/min;检测波长:210nm;进样量20μL,组分E的浓度20mg/mL。

5.如权利要求2所述的应用,其特征在于步骤(4)高效液相制备色谱柱:Agilent Eclipse XDB‑C18 5μm 250*9.4mm;流动相:甲醇‑水;流速:2mL/min;检测波长:210nm;进样量20μL,组分A1浓度20mg/mL。

6.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述发酵液的制备方法为:将海洋细菌GDMCC No:60414接种至斜面YP海水固体培养基,在30℃恒温培养箱中培养过夜,获得斜面菌体;YP海水固体培养基:酵母提取物1g/L,蛋白胨5g/L,海盐22.5g/L,琼脂15g/L,溶剂为去离子水,121℃,灭菌20min;

再将斜面菌体接种至YP海水液体培养基,在30℃恒温摇床中,180rpm振荡培养过夜,获得种子液;YP海水培养基:酵母提取物1g/L,蛋白胨5g/L,海盐22.5g/L,溶剂为去离子水,

121℃,灭菌20min;

将种子液以体积浓度2.5%的接种量接种至YP海水液体培养基中,30℃、压力0.1MPa培养,获得发酵液。