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专利号: 2020105425145
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-10-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种光电化学测定miRNA-21含量的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

(1)BiVO4/ITO电极的制备:将BiVO4分散于水中,形成BiVO4悬浊液;然后在ITO电极表面滴涂BiVO4悬浊液,干燥,即得BiVO4/ITO电极;

(2)生物识别及信号放大反应:对不同浓度的miRNA-21体系分别进行扩增反应,然后加入核酸内切酶进行酶切反应,得到含有较多单链DNA的裂解液;

(3)电极表面杂交识别反应和光电流测定:通过戊二醛交联反应将胺官能团化的探针DNA固定到BiVO4/ITO电极上;然后将步骤(2)所得裂解液、缓冲液体系加入到电极表面,先进行杂交反应,然后加入EXO I继续反应,最后加入信号分子溶液进行孵育;孵育完成后,以该电极作为工作电极,采用三电极体系,进行光电流测定;

(4)线性模型构建:利用步骤(3)中光电流计算得到不同浓度下的光电流差值,然后利用光电流差与miRNA-21的浓度构建得到线性模型;其中,光电流差值为不同miRNA-21浓度的光电流值与miRNA-21浓度为0的光电流值之间的差值。

2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述步骤(3)中信号分子为亚甲基蓝和/或耐尔蓝。

3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述步骤(1)中BiVO4悬浊液的浓度为1mg/mL。

4.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述步骤(1)中BiVO4通过如下方法制备得到:

将铋盐溶液与钒酸盐溶液混合,两种溶液的物质的量浓度之比为1:1,混匀后,移入高压反应釜中进行反应;反应完成后,冷却、洗涤、干燥,得到粉末状BiVO4产物。

5.根据权利要求4所述方法,其特征在于,钒酸盐为偏钒酸铵或钒酸钾中的一种;铋盐为硝酸铋。

6.根据权利要求4所述方法,其特征在于,反应的温度100-200℃,反应的时间为8-20h。

7.根据权利要求1-6任一项所述方法,其特征在于,所述步骤(3)中是将裂解液、缓冲体系滴加至电极表面,在37±0.5℃下进行杂交反应;引入EXO I,在37±0.5℃下继续反应;最后,取10μM信号分子溶液在电极表面37±0.5℃下进行孵育。

8.根据权利要求1-7任一项所述方法,其特征在于,所述步骤(3)中的光电流测定是采用三电极体系,通过电流-时间技术,以所制备的电极作为工作电极,置于pH=7的Tris-HCl中,在相对于Ag/AgCl参比电极为0V的电压下进行测定。

9.根据权利要求1-8任一项所述方法,其特征在于,生物识别及信号放大反应中用到的miRNA-21碱基序列为5'–UAG CUU AUC AGA CUG AUG UUG A–3';锁式探针的碱基序列为5'–TGA TAA GCT ACC ACC TCC GCG CGA AGT CTC AAC ATC AGT C–3';固定电极上的探针DNA碱基序列为5'–NH2–C6 CCA CCT CCG CGC GAA GTC TCA A–3'。

10.根据权利要求1-9任一项所述方法,其特征在于,所述方法还包括:先按照步骤(2)处理待测样品,得到相应的裂解液;然后通过步骤(3)测得待测样品的光电流值;最后通过步骤(4)所得线性模型,计算得到待测样品中miRNA-21的浓度含量。