1.阿耶波多氏芽孢杆菌WZZ10(Bacillus aryabhattai WZZ10),保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M20191099 ,保藏日期 2019 年12月25 日,地址为中国,武汉,武汉大学,邮编 430072。
2.一种权利要求1所述阿耶波多氏芽孢杆菌WZZ10在拆分外消旋(R,S)‑2‑四氢糠酸乙酯制备(R)‑2‑四氢糠酸和 (S)‑2‑四氢糠酸乙酯中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用为:以阿耶波多氏芽孢杆菌WZZ10经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体经冷冻干燥后的干菌体为催化剂,以外消旋(R,S)‑2‑四氢糠酸乙酯为底物,以pH 7.0的磷酸盐缓冲液为反应介质,在15‑35℃,150‑200rpm条件下进行拆分反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得(S)‑2‑四氢糠酸乙酯和(R)‑2‑四氢糠酸。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述底物加入量以缓冲液体积计为1~50g/L;
催化剂加入量以湿菌体重量计为1~50g/L缓冲液,以干菌体重量计为1~20g/L 缓冲液。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:(1)斜面培养:将阿耶波多氏芽孢杆菌WZZ10菌株接种至斜面培养基,在28℃培养1天,获得斜面菌体;斜面培养基组成:蛋白胨10 g/L,酵母膏5 g/L,NaCl 10g/L,质量浓度2%琼脂,溶剂为去离子水,pH 为7.0;
(2)种子培养:取斜面菌体接种于种子培养基,在28℃、180 r/min条件下培养12‑24 h,获得种子液;种子培养基组成:蛋白胨25g/L,葡萄糖20g/L,K2HPO4 1.0 g/L,(NH4)2SO4 5g/L,MgSO4 0.25 g/L,橄榄油10mL/L,溶剂为水,pH 7.0;
(3)发酵培养:在无菌条件下,取种子液以体积浓度1‑2%的接种量接种于发酵培养基中,在28 ℃、180 r/min 条件下培养24 h,获得发酵液,取发酵液在12000 rpm 离心3‑
10min,弃上清液,收集湿菌体;发酵培养基组成为:葡萄糖5 g/L,蛋白胨20 g/L,K2HPO4 1.0 g/L,(NH4)2SO41g/L,MgSO4 0.25 g/L,溶剂为去离子水,pH7.0;
(4)干菌体的制备:取湿菌体在‑20℃条件下冷冻,然后放入真空冷冻干燥机内,在冷阱‑80℃,真空度20 Pa下冷冻干燥12h,获得干菌体。
6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应液分离纯化方法:将反应液过滤,获得滤液和滤饼,滤饼回收催化剂,将滤液调节pH值至4,再加入乙酸乙酯进行萃取,分液得到有机层和水层;将有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤,然后用无水MgSO4干燥后,减压浓缩至无液体流出,得淡黄色液体(S) ‑2‑四氢糠酸乙酯;将水层用3M HCl调节pH值至1‑3,在6mmHg ,90℃下减压蒸馏除水,获得无色液体 (R)‑2‑四氢糠酸。