利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020104413935
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种卤醇脱卤酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第136位脯氨酸突变为天冬酰胺且第137位苯丙氨酸突变为丝氨酸。

2.一种权利要求1所述卤醇脱卤酶突变体的编码基因构建的重组基因工程菌。

3.一种权利要求1所述卤醇脱卤酶突变体在催化1,3‑二氯‑2‑丙醇合成(S)‑环氧氯丙烷中的应用,其特征在于所述应用的方法为:以含卤醇脱卤酶突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体作为催化剂,以1,3‑二氯‑2‑丙醇为底物,以pH 7.0‑10.0的水‑有机溶剂双相体系为反应介质构成反应体系,在300‑700 rpm,37 ℃条件下进行反应,反应结束后,获得含(S)‑环氧氯丙烷的反应液,将反应液分离纯化,获得(S)‑环氧氯丙烷;所述水‑有机溶剂双相体系是由体积比6:4的乙酸乙酯和200 mM、pH 8.0磷酸钠缓冲液组成;所述催化剂用量以湿菌体的重量计为10‑40 g/L缓冲液,所述底物初始加入浓度为

10‑80 mM。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含有卤醇脱卤酶突变体编码基因的重组工程菌接种到含有终浓度为50μg/mL卡那霉素的LB培养液中,在

37 ℃条件下培养8 h,获得种子液;然后将种子液以体积浓度2%的接种量接种至无菌的含有终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,在37 ℃条件下培养约1.5‑2.5 h,使得菌体浓度度OD600为0.4‑0.8,再向培养液中加入终浓度为0.1‑1.0 mM的异丙基硫代‑β‑D‑半乳糖苷,28 ℃诱导表达12 h后,4 ℃、4000 rpm离心10‑20 min,收集湿菌体;LB液体培养基:蛋白胨10 g/L,酵母膏5 g/L,氯化钠10 g/L,溶剂为去离子水,pH 8.0。