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专利号: 2020103686988
申请人: 深圳博成知识产权有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-12-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.利用单针藻细胞制备生物柴油的工艺,其采用产黄纤维单胞菌和/或黑曲霉与单针藻混合发酵的方式。

2.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于,首先共培养黄纤维单胞菌和单针藻,培养一段时间后再接入黑曲霉。

3.利用单针藻细胞制备生物柴油的工艺,其特征在于,所述工艺包括如下步骤:

将产黄纤维单胞菌划线接种在斜面培养基上培养,得到单菌落;挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养,然后进行二级种子培养基培养,获得产黄纤维单胞菌种子液;所述斜面培养基组分为:酵母膏50g/L,葡萄糖30g/L,琼脂20g/L;所述一级种子培养基和二级种子培养基的组分均为:玉米粉30g/L,葡萄糖20g/L,硝酸铵1g/L,七水硫酸镁0.2g/L,磷酸二氢钾0.3g/L,磷酸氢二钾0.3g/L,七水硫酸亚铁0.1g/L;

挑取单针藻,接种到含有生长培养基的容器中,光照强度5000lux,光暗周期为24h,光暗比为14:10,28℃培养,待生长至对数生长期,得到单针藻液;所述生长培养基的组分为:BG-11培养基+10g/L葡萄糖;

将黑曲霉划线接种在斜面培养基上培养,得到单菌落;挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养,然后进行二级种子培养基培养,获得黑曲霉种子液;所述斜面培养基组分为:马铃薯150g/L,蔗糖20g/L,琼脂15g/L;所述一级种子培养基和二级种子培养基的组分均为:玉米粉50g/L,蔗糖10g/L,硫酸铵5g/L,磷酸二氢钾1g/L,磷酸氢二钾1g/L;

将处于对数生长期的单针藻液和产黄纤维单胞菌种子液接种到含有培养基的反应池中,单针藻和产黄纤维单胞菌的接种密度分别为0.5×106个/ml和1×107cfu/ml,温度为28℃,光照强度5000lux,光暗周期为24h,光暗比为14:10,转速为100rpm,发酵时间为4天,然后接入黑曲霉种子液,接种密度为1×108cfu/ml,继续培养3天,培养结束后,经过离心、洗涤和冷冻干燥后,即得到粉末;所述培养基的具体组成如下:木薯渣50g/L,硝酸钠 2g/L,磷酸二氢钾 0.1g/L,碳酸钠 0.1g/L,七水硫酸镁50mg/L,氯化钙30mg/L;

将粉末添加到氯仿甲醇混合溶液中,添加量为1g粉末:2ml氯仿甲醇混合溶液,微波提取,微波功率为100W,提取时间为30min,提取温度为60℃,然后进行超声提取,提取温度为

60℃,超声功率为200W,提取时间为60min,然后离心,收集氯仿相,置于氮气中吹干,并且真空干燥,得到油脂;油脂、脂肪酶以及甲醇按照5ml:1g:6ml的体积比添加到反应器中,催化反应12小时,然后添加占油脂两倍体积的甲醇,继续催化反应20h,终止反应,催化反应在控温为45℃的摇床中进行,摇床转速为100rpm;将反应体系的混合物离心10分钟,12000rpm,将上层液相部分移出,静置分层;取出静置分层后的下层液相,即为生物柴油粗品,再次离心10分钟,12000rpm,取出上层液相,加入2倍体积50℃的超纯水,充分搅动均匀,再次离心

10分钟,12000rpm, 静置分层后得到的上层有机相,分离、取出上层有机相,即得生物柴油。

4.按照上述权利要求1-3所述的工艺制备的生物柴油。