利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020102880228
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)样品叶片采集:在疑似感病植株的枝梢选取叶片取样并标记,得样品叶片;

(2)柑橘溃疡病病原菌培养:挑取柑橘溃疡病单菌落,加入液体LB培养基进行培养,将所得培养液进行悬浮稀释,得病原菌重悬菌液;

(3)样品叶片接种溃疡病鉴定:将步骤(1)所得样品叶片用酒精棉擦拭叶片正背面,将叶片翻转呈叶背朝上,待酒精挥发后,在两侧脉中间处进行穿刺处理,然后将步骤(2)所得病原菌重悬菌液注入叶肉组织进行接种,得接种后的叶片;

(4)样品叶片生根培养:将步骤(3)所得接种后的叶片放入生根培养托盘,用无菌水浇透,再用生根剂浸泡过的润湿棉花条盖住叶片的叶柄部保持水分充足,促进叶柄部生根;将培养托盘放入半封闭状态的自封袋内,定期检查,如果发现盖叶柄的棉花条变干,则及时补浇生根剂;

(5)样品叶片培养管理:步骤(4)所得样品叶片生根后,每周补加水溶性复合肥,并为生根培养的样品叶片补充营养与水分,鉴定溃疡病的样品叶片保存于恒温培养室中,定期观察其发病情况,若感病就保存至溃疡病菌扩散到叶片糜烂。

2.根据权利要求1所述柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:步骤(1)中,所述样品叶片为达到最大叶面积但未完全转绿的嫩叶片。

3.根据权利要求1所述柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:步骤(2)中,所述培养的条件为25‑28℃,150‑200 r/min的恒温摇床内振荡培养18‑20 h。

4.根据权利要求1所述柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:步骤(3)中,所述穿刺处理为:在两侧脉中间处选取至少3处进行针刺,针头部分穿过叶片组织。

5.根据权利要求1所述柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:步骤(3)中,所述

3 6 

接种时病原菌重悬菌液的注射量为10µL,浓度为10‑10 cfu/mL,接种时以两侧脉间的叶肉组织完全浸润为准。

6.根据权利要求1所述柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:步骤(3)中,接种后用吸水纸擦干叶表残留重悬菌液。

7.根据权利要求1‑6之一所述柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法,其特征在于:步骤(5)中,恒温培养室的培养条件为温度25‑28℃、湿度80%~90%。