1.一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒,其特征在于:包括用于检测与叶酸代谢通路相关的MTR基因RS1805087位点、CBS基因RS5742905位点、MTRR基因RS1801394位点、MTHFR 基因rs1801131位点和MTHFR 基因RS1801133位点的引物组合物,所述引物组合物的序列为:
MTR基因RS1805087位点的正反向PCR引物:SEQ ID No: 1‑2,正向延伸引物:SEQ ID No:11;
CBS基因RS5742905位点的正反向PCR引物:SEQ ID No: 3‑4,正向延伸引物:SEQ ID No:12;
MTRR基因RS1801394位点的正反向PCR引物:SEQ ID No: 5‑6,正向延伸引物:SEQ ID No:13;
MTHFR 基因RS1801131位点的正反向PCR引物:SEQ ID No:7‑8,正向延伸引物:SEQ ID No:14;
MTHFR 基因RS1801133位点的正反向PCR引物:SEQ ID No: 9‑10,正向延伸引物:SEQ ID No:15;
正向延伸引物序列中的5’端采用不同数量的ploy T修饰;其中,MTR基因RS1805087位点的正向延伸引物上的ploy T修饰数量11;CBS基因RS5742905位点的正向延伸引物上的ploy T修饰数量19;MTRR基因RS1801394位点的正向延伸引物上的ploy T修饰数量为32;
MTHFR 基因RS1801131位点的正向延伸引物上的ploy T修饰数量为14;MTHFR 基因RS1801133位点的正向延伸引物上的ploy T修饰数量为26;
所述MTR基因RS1805087位点、CBS基因RS5742905位点、MTRR基因RS1801394位点、MTHFR 基因RS1801131位点和MTHFR 基因RS1801133位点的正向延伸引物浓度比为1:2:3:2:3;
所述MTR基因RS1805087位点、CBS基因RS5742905位点、MTRR基因RS1801394位点、MTHFR 基因RS1801131位点和MTHFR 基因RS1801133位点的各对正反向PCR引物浓度比为1:2:1:1:
1。
2.如权利要求1所述的一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括以下试剂:
(1)多重PCR扩增试剂:包括dNTPs、TaqDNA 聚合酶、PCR反应缓冲液、1x GC‑I 缓冲液、
2+
Mg :
(2)PCR产物纯化试剂:AP酶、Exol1酶、Seq buffer;(3)多重单碱基延伸反应试剂:SNaPshot Multiplex Kit ABI;
(4)延伸产物纯化试剂:SAP酶;
(5)测序变性反应试剂:120 LizSIZE STANDARD内标、Hi‑Di甲酰胺。
3.如权利要求2所述的一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒,其特征在于:纯化后多重PCR产物、正向延伸引物组合物与多重单碱基延伸反应试剂中的SNaPshot Multiplex KitABI的体积比为2:1:5。
4.如权利要求2所述的一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒,其特征在于:纯化后的延伸产物与测序变性反应试剂中的120 Liz SIZE STANDARD内标、Hi‑Di甲酰胺的体积比为1:1:18。