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专利号: 2019112899088
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-06
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)ZY,其特征在于为:Microbacterium keratanolyticum,保藏号:CCTCC NO:M 2019953。

2.如权利要求1所述的微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)ZY的用途,其特征在于:生物降解二氯甲烷。

3.根据权利要求2所述的微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)ZY的用途,其特征在于:将微杆菌ZY种子培养后获得的种子液离心,用无机盐溶液清洗重悬,接种至含二氯甲烷的液体/含二氯甲烷的液体选择培养基中,以二氯甲烷为碳源,在20~40℃(优选30℃)、(160±30)rpm条件下培养,实现二氯甲烷的降解;

所述二氯甲烷液体选择培养基的终浓度组成为:Na2HPO4·12H2O 4500mg·L-1,KH2PO41000mg·L-1,(NH4)2SO4 1800mg·L-1,二氯甲烷50-500mg/L(优选100mg·L-1),MgSO4·7H2O 200mg·L-1,葡萄糖10mg·L-1,CuSO4·5H2O 0.02mg·L-1,FeSO4·7H2O 1mg·-1 -1 -1 -1L ,H3BO30.014mg·L ,MnSO4·4H2O 0.1mg·L ,ZnSO4·7H2O 0.1mg·L ,Na2MoO4·2H2O 

0.02mg·L-1,溶剂为超纯水;

pH为4.0-8.0。

4.根据权利要求3所述的微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)ZY的用途,其特征在于所述含菌悬液按如下步骤制备:(1)斜面培养:将微杆菌ZY接种至斜面培养基,30℃培养3天,获得菌体斜面;所述斜面培养基终浓度组成为:Na2HPO4·12H2O 4500mg·L-1,KH2PO4 1000mg·L-1,(NH4)2SO4 

1800mg·L-1,二氯甲烷100mg·L-1,MgSO4·7H2O 200mg·L-1,葡萄糖10mg·L-1,CuSO4·5H2O 

0.02mg·L-1,FeSO4·7H2O 1mg·L-1,H3BO3 0.014mg·L-1,MnSO4·4H2O 0.1mg·L-1,ZnSO4·

7H2O 0.1mg·L-1,Na2MoO4·2H2O 0.02mg·L-1,溶剂为超纯水,pH值7.0,琼脂18~20g·L-1(优选18g·L-1);

(2)种子培养:从菌体斜面挑取1接种环的单菌落接种至50mL的LB液体培养基(种子培养基),30℃培养20h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:NaNO3 14.5g·L-1,酵母浸粉5g·L-1,蛋白胨10g·L-1,溶剂为超纯水,pH值7.0;

(3)发酵培养:将种子液离心并用无机盐溶液清洗重悬,按菌重为50mg·L-1的接种量接种至发酵培养基,30℃培养,获得发酵培养液即为含菌悬液;所述发酵培养基终浓度组成为:Na2HPO4·12H2O 4500mg·L-1,KH2PO4 1000mg·L-1,(NH4)2SO4 1800mg·L-1,二氯甲烷

100mg·L-1,MgSO4·7H2O 200mg·L-1,葡萄糖10mg·L-1,CuSO4·5H2O 0.02mg·L-1,FeSO4·

7H2O 1mg·L-1,H3BO3 0.014mg·L-1,MnSO4·4H2O 0.1mg·L-1,ZnSO4·7H2O 0.1mg·L-1,Na2MoO4·2H2O 0.02mg·L-1,溶剂为超纯水,pH值7.0。