利索能及
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专利号: 2019110166970
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.赤眼鳟MDA5双链RNA结合位点区或含有该双链RNA结合位点区的表达质粒在提高草鱼抗GCRV上的应用,所述双链RNA结合位点区的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述赤眼鳟MDA5双链RNA结合位点区扩增的方法为:以赤眼鳟的基因组DNA为扩增模板,以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增,得到SEQ ID No.3所示的赤眼鳟MDA5双链RNA结合位点区。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述含有该双链RNA结合位点区的表达质粒通过以下方法制备:以赤眼鳟的基因组DNA为扩增模板,以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增,得到SEQ ID No.3所示的赤眼鳟MDA5双链RNA结合位点区;挑选目的产物进行纯化和回收,测序验证后经KpnⅠ和BamHⅠ 酶切,然后与同样经KpnⅠ和BamHⅠ 酶切的pEGFP‑N1‑Flag载体进行连接;连接体系为:0.5微升胶纯化回收片段、2.5微升线性化pEGFP‑N1‑Flag、1微升ExnaseⅡ、2微升5× CE Ⅱ Buffer和4微升ddH2O;37 ℃连接30 min;在转化涂板后挑菌测序,获取含有SEQ ID No.3所示的核苷酸片段的表达质粒。