利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2019110105873
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.基于随机G4串联体的智能逻辑门构建方法,其特征在于,具体步骤如下:

(1)DNA预处理:DNA溶液+TCEP混合均匀,冷冻备用;

其中,所述DNA溶液浓度为0.3~1.1μM,用量为30~150μL;所述TCEP浓度为1~70mM,用量为0.5~10μL;

(2)金电极使用前用直径为0.3μm的Al2O3粉末进行打磨,利用超纯水通过超声清洗3次,之后置于氮气流中干燥,再将其浸泡于H2SO4(0.2~1.5M)溶液中,在‑0.3V~+1.2V范围内进行循环伏安扫描5~20min,最后再经超纯水清洗后氮气吹干备用;

其中所述H2SO4溶液浓度为0.2~1.5M;

(3)取DNA溶液,80~95℃下加热3~8min,然后逐渐冷却至室温,滴涂于Au表面,在4℃冰箱孵育过夜,捕获探针DNA通过末端标记的巯基与金电极表面自发形成Au‑S共价键结合而固定于金电极表面;修饰了捕获探针DNA的金电极,用蒸馏水缓缓冲洗电极,采用0.8~

1.5mM巯基己醇MCH处理16~45min,通过MCH与金表面的Au‑S共价结合而置换电极表面非Au‑S键固定的捕获探针;蒸馏水缓缓冲洗;

其中所述DNA溶液浓度为0.08~1.2μM,用量为2~8μL;

(4)将0.3~2.7μL蒸馏水,0.3~2μL 5×TdT缓冲液,dNTP,0.2~3μL浓度为1~1000U/mL的TdT,混合均匀,滴于DNA/Au表面,在20~40℃下放置1h后,用蒸馏水缓缓冲洗电极;聚合反应后,再加入2~7μL缓冲液,室温放置0.2~1h后,蒸馏水缓缓冲洗电极;向上述电极上滴加hemin,室温放置0.3~1h;

其中所述dNTP构成如下:0.1~1μL dTTP+0.15~1.5μL dGTP,2~20mM;

所述缓冲液构成如下:1~20mM Tris‑HCl,5~100mM KCl,pH 7.4;

所述hemin浓度为1μM,用量为2.5μL;

(5)电化学检测:修饰电极于PBS溶液中用循环伏安法扫描检测电极对该溶液的响应;

其中所述PBS溶液含2mM TMB,2mM H2O2;

在步骤(4)中将dTTP替换为dATP构建传感器,其它条件及步骤同(1)~(5);

通过更换不同的“输入”所得到的“输出”,实现了YES、OR和AND智能逻辑门构建;其中所述不同的“输入”是指基于TdT、H2O2、dATP、dTTP和dGTP五种。

2.根据权利要求1所述基于随机G4串联体的智能逻辑门构建方法,其特征在于,YES逻辑门中,对于“输入”,“1”表示TdT加入,“0”表示TdT未加入, 对于“输出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生;或者对于“输入”,“1”表示H2O2加入,“0”表示H2O2未加入,对于“输出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生。

3.根据权利要求1所述基于随机G4串联体的智能逻辑门构建方法,其特征在于,OR逻辑门中,对于“输入”,“1”表示dTTP或dATP加入,“0”表示dTTP或dATP未加入,对于“输出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生。

4.根据权利要求1所述基于随机G4串联体的智能逻辑门构建方法,其特征在于,AND逻辑门中,对于“输入”,“1”表示dTTP或dGTP加入,“0”表示dTTP或dGTP未加入;对于“输出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生;或者,对于“输入”,“1”表示dATP或dGTP加入,“0”表示dATP或dGTP未加入;对于“输出”“1”表示信号产生,“0”表示信号未产生。

5.根据权利要求1‑4任意一项所述方法构建的基于随机G4串联体的智能逻辑门的应用,其特征在于,应用于TdT和H2O2的浓度检测。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,TdT检测限为0.27U/L;H2O2检测限为0.3μM。