1.一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,按以下步骤进行:
(1)将采集到的动物精液在20-35℃保存;
(2)将步骤(1)中的动物精液测量密度,用动物精子稀释液按精子数300-1000万/mL稀释,灌装到冻精细管中并封口,得到细管精液;
(3)将步骤(2)中的细管精液以0.1-0.5℃/min的速度降温,降到0-4℃;
(4)将步骤(3)中的细管精液静置1h-2h;
(5)将步骤(4)的细管精液放在液氮上方,距离液氮面高度1.0cm-2.0cm,温度为零下
100℃-120℃,熏蒸5min-15min,直接投到液氮里,得到细管冻精,在液氮里把细管冻精装到纱布袋里备用。
2.根据权利要求1所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,所述动物精子稀释液,由50mL-100mL丙三醇、10g-20g葡萄糖、10g-20g果糖、20g-30g三羟甲基氨基甲烷、10g-
20g柠檬酸、0.1g-0.5g脱脂小麦蛋白粉、0.1g-1g脱脂豌豆蛋白粉、0.5g-1g脱脂花生蛋白粉、0.5g-1g脱脂大豆蛋白粉和180mL-190mL灭菌蒸馏水组成。
3.根据权利要求1所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,动物精子稀释液按以下步骤制备:(1)用分析天平称20g-30g三羟甲基氨基甲烷,然后取180mL-190mL灭菌蒸馏水,在容量瓶中混合溶解,得混合物;
(2)分别称取:分别称取0.5g-1g脱脂大豆蛋白粉、0.1g-1g脱脂豌豆蛋白粉、0.5g-1g脱脂花生蛋白粉和0.1g-0.5g脱脂小麦蛋白粉溶于步骤(1)的混合物中,超声波裂解大分子蛋白、细菌和病毒,获得低分子蛋白或多肽混合的无菌溶液;放入4℃冷藏沉降24h-48h;
(3)弃去步骤(2)中的沉淀物,得上清液;在分析天平上分别称取10g-20g柠檬酸、10g-
20g葡萄糖、10g-20g果糖和50mL-100mL丙三醇加入上述上清液中,超声波混匀裂解细菌和病毒,放入4℃冷藏得到动物精子稀释液。
4.根据权利要求2或3所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,脱脂豌豆蛋白粉的质量为0.1g-0.5g。
5.根据权利要求2或3所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,脱脂豌豆蛋白粉的质量为0.1g。
6.根据权利要求2或3所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,三羟甲基氨基甲烷的质量为20g,灭菌蒸馏水的体积为180mL,柠檬酸质量为10g或12g,葡萄糖质量为10g或15g,脱脂大豆蛋白粉的质量为0.5g,脱脂花生蛋白粉的质量0.5g,脱脂小麦蛋白粉的质量0.2g,果糖质量为10g,丙三醇体积为50mL。
7.根据权利要求1-3任一项所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,步骤(1)中,保存温度为28℃;步骤(2)中,用动物精子稀释液按精子数500万/mL稀释。
8.根据权利要求1-3任一项所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,步骤(3)中,以0.2℃/min的速度降温,降到4℃。
9.根据权利要求1-3任一项所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,步骤(4)中,细管精液平衡1h。
10.根据权利要求1-3任一项所述一种冷冻保存动物精子的方法,其特征在于,步骤(5)中,距离液氮面高度2.5cm,温度为零下110℃,熏蒸10min。