利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2019108633274
申请人: 安徽工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-06
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种氨基磁性纳米粒子的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)Fe3O4磁性纳米颗粒的制备:先使用氮气对去离子水进行脱气处理20-40min,除去溶剂中溶解的氧;然后,加入FeSO4·7H2O和FeCl3·6H2O,以400-500rpm的搅拌转速进行磁力加热搅拌,温度逐渐升至70-90℃,以确保反应体系中的盐成分完全溶解;随后,将NaOH溶液缓慢加到铁盐混合物中,并同时提高搅拌速率至800-1000rpm,在pH为12下,溶液逐渐变为黑色,继续保持20-40min以确保反应完全;最后,用磁铁进行固液分离,除去体系中没有磁性的部分,得到黑褐色有磁性的固体,再用蒸馏水洗涤数次至中性,再用磁铁进行分离,即得到Fe3O4磁性纳米颗粒MNPs,将其分散在蒸馏水中得到MNPs分散液。

(2)酒石酸氢钠包裹的Fe3O4磁性纳米颗粒的制备:向烧杯中加入蒸馏水和酒石酸氢钠,搅拌溶解后,加入步骤(1)中制备的MNPs分散液,超声3-5小时,而后使用磁铁进行固液分离,除去体系中没有磁性的部分,再用蒸馏水洗涤至中性,最后用蒸馏水重悬,即得到酒石酸氢钠包裹的Fe3O4磁性纳米颗粒SHT-MNPs;

(3)乙二胺修饰的酒石酸氢钠包裹的Fe3O4磁性纳米颗粒的制备:取上述步骤(2)制备的SHT-MNPs,加入催化剂4-二甲氨基吡啶和反应物乙二胺,40-50℃恒温水浴加热3-5h,使用磁铁进行固液分离,除去体系中没有磁性的部分,再用蒸馏水洗涤至中性,除去催化剂和未反应的乙二胺,最后加入一定量的蒸馏水重悬,得到产物乙二胺修饰的酒石酸氢钠包裹的Fe3O4纳米颗粒EDA-SHT-MNPs,即氨基磁性纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤1中加入的FeSO4·7H2O和FeCl3·6H2O的Fe2+和Fe3+离子的比例为2:1。

3.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤1中加入的NaOH溶液浓度为1mol/L。

4.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述MNPs分散液中MNPs的浓度为4.8mg/mL。

5.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述氨基磁性纳米粒子表面带有氨基且带正电荷。

6.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子在细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的提取和纯化中的应用。

7.根据权利要求6所述的氨基磁性纳米粒子提取纯化细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的方法,其特征在于,具体操作步骤如下:S1、裂解:a、细菌样品裂解液制备:取培养过夜的菌液,离心弃上清。细菌沉淀中加入碱裂解液Ⅰ充分重悬菌体,再加入碱裂解液Ⅱ,温和翻转4-6次,直到形成透亮溶液,最后加入碱裂解液Ⅲ,温和翻转混合6-8次,离心机12000×g离心10min,留上清,得到细菌样品裂解液;b、哺乳动物样品裂解液制备:于细胞沉淀中加入裂解液,50℃消化过夜,直至消化完全,得到哺乳动物样品裂解液;

S2、结合:先将EDA-SHT-MNPs重悬于结合缓冲液中,分别加入上述步骤S1所述样品裂解液,室温结合4-6min,磁分离,弃上清,用70-80%乙醇清洗两次,稍晾干;

S3、洗脱:用TE缓冲液将DNA从磁性粒子上洗脱下来,60-70℃温育5-10min,磁分离后上清即为所提取DNA。

8.根据权利要求7所述的氨基磁性纳米粒子提取纯化细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的方法,其特征在于,所述结合缓冲液为30%(w/v)PEG8000和1.25mol/L氯化钠的混合溶液。

9.根据权利要求7所述的氨基磁性纳米粒子提取纯化细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤a中碱裂解液Ⅰ中加入RNA酶A,碱裂解液Ⅰ、碱裂解液Ⅱ和碱裂解液Ⅲ的体积比为1:1:1.4。

10.根据权利要求7所述的氨基磁性纳米粒子提取纯化细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤b中裂解液加入蛋白酶K和RNA酶A。