利索能及
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专利号: 2019103834968
申请人: 沧州职业技术学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种观察外植体发生途径的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)材料的获得:摘取燕子掌新鲜的健康叶片和茎段,在自来水下冲洗表面20min;

(2)无菌处理:将冲洗完成后的叶片和茎段在超净工作台上用75%的酒精浸泡15s,浸泡完成后用无菌水冲洗1次,然后浸泡于0.1%的升汞溶液中消毒6min,消毒完成后再用无菌水冲洗3‑5次,最后用消毒滤纸吸干叶片和茎段表面的水分;

(3)无菌短枝型:将步骤(2)获得的茎段切成具有一对腋芽的小茎段接种至MS基本培养基上,诱导茎段生长;所述MS基本培养基为MS+蔗糖20g/L+琼脂6g/L,pH为5.8‑6.0;

(4)丛生芽增殖型:将步骤(2)获得的茎段切成具有一对腋芽的小茎段接种至丛生芽增殖培养基上,诱导产生丛生芽;所述丛生芽增殖培养基为MS+6‑BA0.5mg/L+NAA0.5 mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L,pH为5.8‑6.0;

(5)胚状体发生型:将步骤(2)获得的叶片切成约1.0cm×1.0cm的大小接种至MS基本培养基上,诱导产生不定芽;所述MS基本培养基为MS+蔗糖20g/L+琼脂6g/L,pH为5.8‑6.0;

(6)器官发生型Ⅰ:将步骤(2)获得的叶片切成约1.0cm×1.0cm的大小接种至愈伤组织诱导培养基上,诱导产生愈伤组织;所述愈伤组织诱导培养基是MS+6‑BA2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L,pH为5.8‑6.0;

(7)器官发生型Ⅱ:将步骤(6)获得的愈伤组织切成0.5cm×0.5cm的大小接种至MS基本培养基上,诱导愈伤组织再分化形成小苗;所述MS基本培养基为MS+蔗糖20g/L+琼脂6g/L,pH为5.8‑6.0。

2.如权利要求1所述的一种观察外植体发生途径的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的无菌操作台在使用之前需开启紫外线杀菌灯和风机进行杀菌30min。

3.如权利要求1所述的一种观察外植体发生途径的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的0.1%的升汞溶液中包含1‑2滴20mg/L的吐温。

4.如权利要求1所述的一种观察外植体发生途径的方法,其特征在于:所述步骤(3)至所述步骤(7)的培养条件为温度24‑26℃,光照强度2000‑3000lux,光照时间10‑12h/d。