1.一种复合益生菌菌液在制备复合益生菌发酵饲料中的应用,其特征在于:所述复合益生菌菌液,以重量份数比计,它包括养料液8‑10份、约氏乳杆菌菌剂8‑15份、保加利亚乳杆菌菌剂25‑30份、双歧杆菌菌剂15‑20份、伯顿毕赤酵母菌剂 5‑8 份;所述约氏乳杆菌菌剂、保加利亚乳杆菌菌剂、双歧杆菌菌剂、伯顿毕赤酵母菌剂分别由发酵液与相应菌制备而成;
其中,所述养料液为双孢蘑菇罐藏加工废水经浓缩、醇沉、收集沉淀、沉淀溶于水所得的溶液;
所述发酵液为双孢蘑菇罐藏加工废水经浓缩、醇沉、过滤去除沉淀、收集滤液、滤液浓缩后所得的溶液;
所述约氏乳杆菌菌剂、保加利亚乳杆菌菌剂、双歧杆菌菌剂、伯顿毕赤酵母菌剂的活菌数均为2 3亿个/mL;
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所述发酵液中可溶性固形物浓度为0.2%‑2%;
所述养料液折光率达到58~60%;
所述的复合益生菌菌液的制备方法,它包括以下工艺步骤:(1)制备养料液与发酵液;(2)活化各菌种;(3)制备约氏乳杆菌种子悬液、保加利亚乳杆菌种子悬液、双歧杆菌种子悬液、伯顿毕赤酵母种子悬液;(4)制备约氏乳杆菌菌剂、保加利亚乳杆菌菌剂、双歧杆菌菌剂、伯顿毕赤酵母菌剂;(5)制备菌液;
其中,步骤(1)中养料液与发酵液的具体制备方法为:a.收集双孢蘑菇罐藏加工过程中所产生的工业废水;
b.将收集来的双孢蘑菇罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心,取上清液;
c.将所得的上清液利用降膜蒸发器,降膜蒸发浓缩,浓缩至溶液折光率达到35~55% ,得浓缩液;
d.对浓缩液进行梯度递增醇沉,回收每次醇沉后所得的沉淀,并收集最后一次醇沉后,过滤所得的终滤液; 步骤d的具体操作方法为:在浓缩液中边搅拌边加入无水乙醇,使含醇量达到25%,在室温下静置12‑15h,进行第一次醇沉;第一次醇沉之后,过滤,并分别收集过滤后所得的第一滤液与第一沉淀;
接着,在第一滤液中边搅拌边加入无水乙醇,使含醇量达到35%,在室温下静置5‑6h,进行第二次醇沉;第二次醇沉之后,过滤,并分别收集过滤后所得的第二滤液与第二沉淀;
最后,在第二滤液中边搅拌边加入无水乙醇,使含醇量达到50%,在室温下静置2‑3h,进行第三次醇沉;第三次醇沉之后,过滤,并分别收集过滤后所得的终滤液与第三沉淀;
e.将步骤d收集的终滤液进行旋转蒸发浓缩并除去乙醇,旋转蒸发浓缩至终滤液中可溶性固形物浓度达0.2%‑2%,然后将浓缩后的终滤液pH调节至6.5‑6.8,再经121‑122℃,湿热灭菌10‑20min后,得所述发酵液;
f.将步骤d回收的沉淀进行合并,之后将合并的沉淀溶解于水,并使溶解所得的溶液折光率达到58~60%,之后将溶解所得的溶液在121‑122℃下,湿热灭菌10‑20min后,得所述养料液;
步骤(2)活化各菌种的具体过程为:将约氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌、伯顿毕赤酵母分别对应接种于含有MRS斜面培养基、日本乳酸菌斜面培养基、双歧杆菌斜面培养基、YM斜面培养基的4个斜面上进行分开培养18 24h,培养时温度控制在24 35℃;
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步骤(3)制备约氏乳杆菌种子悬液、保加利亚乳杆菌种子悬液、双歧杆菌种子悬液、伯顿毕赤酵母种子悬液的具体方法为:用接种环挑取1环步骤(2)已活化的约氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌、伯顿毕赤酵母,分别对应接入装有100‑150mL的MRS液体培养基、日本乳酸菌液体培养基、双歧杆菌液体培养基、YM液体培养基的4个三角瓶中,约氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌在28‑40℃条件下进行厌氧培养培养24‑48 h,伯顿毕赤酵母在25‑
28℃、150‑200 rpm条件下,进行摇床振荡培养24‑48 h,即分别得所述约氏乳杆菌种子悬液、保加利亚乳杆菌种子悬液、双歧杆菌种子悬液、伯顿毕赤酵母种子悬液;
步骤(4)制备约氏乳杆菌菌剂、保加利亚乳杆菌菌剂、双歧杆菌菌剂、伯顿毕赤酵母菌剂的方法为:取4个250ml的三角瓶,将步骤(1)所得的发酵液置于三角瓶中,且每个三角瓶中发酵液的体积为85‑95ml;接着将步骤(3)所得的约氏乳杆菌种子悬液、保加利亚乳杆菌种子悬液、双歧杆菌种子悬液、伯顿毕赤酵母种子悬液分别接种于对应的三角瓶中,每个三角瓶的接种量均为3%‑10%,接种之后,约氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌在26‑38℃条件下进行厌氧静置培养24‑48h,使活菌数均达2 3亿个/mL,伯顿毕赤酵母在26‑38℃,转速~
为100‑250rpm条件下,进行振荡培养24‑48h,使活菌数为2 3亿个/mL,即分别得所述约氏乳~
杆菌菌剂、保加利亚乳杆菌菌剂、双歧杆菌菌剂、伯顿毕赤酵母菌剂;
步骤(5)制备菌液的方法为:将经步骤(1)所得的养料液与步骤(4)所得的约氏乳杆菌菌剂、保加利亚乳杆菌菌剂、双歧杆菌菌剂、伯顿毕赤酵母菌剂进行混合,即得所述复合益生菌菌液。
2.一种复合益生菌发酵饲料,其特征在于:以重量份数比计,它包括权利要求1所述的复合益生菌菌液5‑8份、鱼粉20~30份、豆粕9~11份、莲子壳15 20份、紫苏0.5 1份、桔梗5~ ~ ~
8份、花生粕8~10份、菜粕0.5~1份、豆油5~8份、鱼油2~3份、磷酸二氢钙2~3份。
3.根据权利要求2所述的复合益生菌发酵饲料的制备方法,其特征在于:它包括以下工艺步骤:
1)将莲子壳、紫苏、桔梗混合后置于粉碎机中进行粉碎处理,并将粉碎后所得的粉末过
120目筛网,得初混料;
2)将步骤1)所得的初混料与鱼粉、豆粕、花生粕、菜粕、豆油、鱼油、磷酸二氢钙混合后置于研磨机中研磨,之后,将研磨所得的混合物过120目筛网,得次混料;
3)将复合益生菌菌液与步骤2)所得的次混料搅拌混合均匀,即得所述复合益生菌发酵饲料。