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专利号: 2019101562935
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-17
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.家蚕丝腺增量表达抗菌肽BmGlv2在提高蚕丝抗菌性能中的应用,其特征在于:所述抗菌肽BmGlv2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述抗菌为抗真菌;所述真菌为球孢白僵菌或烟色曲霉菌。

2.一种提高蚕丝抗菌性能的方法,其特征在于,包括如下步骤:构建家蚕丝腺特异表达启动子调控抗菌肽BmGlv2表达的转基因重组表达载体,转化然后获得丝腺增量表达抗菌肽BmGlv2的转基因家蚕品系,其获得的蚕丝即为高抗菌性能的蚕丝,所述抗菌肽BmGlv2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述抗菌为抗真菌;所述真菌为球孢白僵菌或烟色曲霉菌。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述转基因重组表达载体构建方法如下:

以家蚕cDNA为模板,SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列为引物进行PCR扩增,克隆获得抗菌肽BmGlv2基因,连入pMD‑19T载体上,获得pMD‑19T‑BmGlv2重组载体;然后以pSL1180 [hr3Pser1spRedSer1PA]载体为模板,SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列为引物扩增获得家蚕丝腺特异表达的Ser1启动子,利用Spe I 和 Xho I将获得的家蚕丝腺特异表达的Ser1启动子插入至pMD‑19T‑BmGlv2载体上,获得pMD‑19T‑Ser1‑BmGlv2重组载体,接着用Asc I限制性内切酶酶切pMD‑19T‑Ser1‑BmGlv2重组载体获得目的片段‑Ser1‑BmGlv2,将目的片段‑Ser1‑BmGlv2重组到转基因载体pyggBac[3xP3DsRed, af],获得转基因重组载体,命名为pBac [3xp3DsRed, SV40‑BmGlv2‑Ser1]。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,获得转基因家蚕品系的方法如下:将所述转基因重组表达载体与辅助质粒phsp70PIG按1:1的摩尔比例混合,利用转基因微注射仪注射到2小时内生产的非滞育蚕卵中,然后将此G0代蚕卵孵育后饲养为成虫并产下G1代的蚕卵,观察胚胎时期的蚕卵,筛选眼睛中带红色荧光标记的家蚕为阳性个体。