1.一种二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的制备方法,其特征在于,所述二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的制备方法包括以下步骤:第一步,将0.048g二醛羧甲基纤维素DCMC溶解在2mL 60℃的水中,得到24%w/v的溶液;
第二步,在60℃下将8mL丝胶溶液3.75%w/v加入到DCMC溶液中并持续搅拌1小时;
第三步,将混合物转移到培养皿中并在37℃下风干制得DCMC/SS膜;
所述第一步的二醛羧甲基纤维素的制备方法包括:将CMC 1g和高碘酸钠0.98g溶解在
30mL水中,用盐酸HCl调节混合溶液pH至3.5;然后移至用锡箔纸包裹的离心管中,并在40℃下孵育6小时;将孵育后的溶液取出加入4‑7倍体积的乙醇使得到的DCMC沉淀,依次用水和乙醇洗涤三次后,将沉淀的DCMC风干并储存在‑4℃。
2.如权利要求1所述的二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的制备方法,其特征在于,所述二醛羧甲基纤维素中醛含量的测定方法包括:将二醛羧甲基纤维素DCMC粉末0.5g溶解在25mL水中,然后用氢氧化钠NaOH调节至pH 5.0,然后将盐酸羟胺H2NOH·HCl 0.05g/mL,pH 5.0,20mL加入到DCMC溶液中,在40℃下搅拌4小时;然后用1.0mol/L NaOH滴定释放的盐酸,将NaOH消耗体积记录为Vd,以同等条件滴定CMC,并将消耗的氢氧化钠体积记录为Vc,DCMC中的醛基含量AC通过下式计算:CNaOH=1.0mol/L,m是DCMC的质量,以g计;242.16是DCMC中重复单元的分子量,每个测试重复三次。
3.如权利要求1所述的二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的制备方法,其特征在于,所述第一步的丝胶溶液的制备方法包括:将蚕茧剪成碎片,在0.1MPa、120℃下煮沸20分钟,将丝胶溶解到水中,通过过滤除去丝胶蛋白包裹的丝素蛋白,将得到的丝胶蛋白溶液冻干并储存在‑20℃。
4.一种由权利要求1~3任意一项所述二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的制备方法制备的二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜。
5.一种如权利要求4所述二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜在生物医学中的应用。
6.一种如权利要求4所述二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的检测方法,其特征在于,所述二醛羧甲基纤维素/丝胶蛋白复合膜的检测方法包括:(1)使用Thermo Fisher Nicolet iz10在25℃下记录CMC,DCMC和DCMC/SS复合膜的FT‑‑1 ‑1
IR光谱,波长扫描范围为850至4000cm ,分辨率为2cm ,每个样品扫描16次;
(2)通过JEOL扫描电子显微镜JCM‑5000观测膜的表面形态;使用双面胶带将样品固定在铝柱台上,并在镀金120s后放大10000倍,以15kV的加速电压拍摄SEM图像;
(3)测量DCMC/SS复合薄膜的拉伸强度,断裂伸长率和杨氏模量,实验参照D828‑97标准方法;首先测量膜的厚度以进行机械性能分析,将每组薄膜分别制备得到八个矩形条,宽
10mm,长25mm,夹具之间的标距长度为15mm,牵引速度为2mm/min,拉伸强度,断裂伸长率和杨氏模量分别由相应的应力‑应变曲线计算获得;
(4)DCMC/SS薄膜的溶胀性能测量,将干膜裁剪成20mm×20mm的矩形条,称重记为W0,然后将膜浸入10mL水中;以12小时为时间间隔,测量3个时刻点,每个时刻点测量时,将膜取出并除去膜表面多余的水后,称重记为WS,膜的溶胀比SR计算如下:(5)润湿性:首先,将边长为20mm的DCMC/SS正方形膜放置在样品平台上;然后,用精密注射器将一滴水5μL滴于膜表面上;最后,使用krüss液滴形状分析软件调整基线并测量液滴边界切线之间的左右接触角,每个薄膜测试五次,所有测试均在23±2℃和50±3%的相对湿度下进行;
(6)水溶性:将边长为20mm的正方形膜在65℃下干燥至恒重Wsol,然后浸入10mL PBS缓冲液pH 4.0,7.4,10.0的6孔细胞板中,密封板孔,在不同的时间间隔,取出膜,洗涤,干燥并称重W1,样品的总可溶物质计算如下:
每个膜测试三次,取平均值用于计算;
(7)热重分析TGA,使用热重分析仪评估DCMC/SS膜的热稳定性,在25℃‑800℃,氮气保护下以10℃/min的加热速率进行实验,以避免热氧化反应;
(8)溶血试验,从健康无疾病的兔子体内收集血液,用枸橼酸葡萄糖液处理以进行抗凝血实验,以800rpm/min离心血液,收集红细胞沉淀并重悬于10mL PBS缓冲液pH 7.4中,将膜
15mm×15mm浸入无菌PBS缓冲液pH 7.4中,37℃下孵育30分钟后,将处理过的薄膜浸没在红细胞重悬液中,并在37℃下孵育1小时;然后,将样品以1,000rpm/min离心5分钟,最后用分光光度计读取上清液在540nm处吸光度值,所有样品测试3次,将水和PBS分别作为阳性P和阴性N对照,溶血率根据以下公式计算:
(9)细胞相容性,将小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3细胞在含有10%胎牛血清,1%青霉素/链霉素和5%CO2的Dulbecco's改良Eagle培养基DMEM中于37℃,95%相对湿度下培养,3
将圆形无菌DCMC膜置于96孔板底部,再将NIH3T3细胞以每孔5×10 个细胞的密度接种在96孔板中;24小时后,向每孔中加入10μL CCK8溶液,然后将细胞在37℃下培养3小时;最后,用Glomax MultiDetectionSystem在450nm处测定溶液的吸光度,每组内的细胞活力表示为处理组细胞吸光度与未处理细胞吸光度的百分比;对于每个实验测试三个样品;此外,通过LIVE/DEAD染色评估DCMC/SS膜的细胞毒性,以同上的方法铺板24小时后,将细胞与染色液在37℃下孵育15分钟,然后在Olympus荧光显微镜IX71观察,每个样品测试三次。