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专利号: 2018114637719
申请人: 曲阜师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物,其特征在于,所述提取复合物从海洋放线菌F8的液体发酵产物中提取;所述海洋放线菌为灰略红链霉菌(streptomyces griseorubens)F8,于2017年11月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号:CGMCC No.14923。

2.根据权利要求1所述的一种海洋放线菌液体发酵产物提取复合物,其特征在于,所述海洋放线菌发酵所用培养基和种子液培养基的pH 均为7.5-8,121℃灭菌20min;均由以下组分组成:KNO3 1g,K2HPO4 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,MgSO4·7H2O 0.5g,NaCl 0.5,自然海水1L。

3.一种权利要求1或2所述的提取复合物的提取方法,其特征在于,采用以下步骤:(1)发酵液的制备

将菌株接种到种子液培养基中,于25-30℃、180-250r/min条件下摇瓶培养2-3d,获得种子液;将种子液以8%的接种量接种到培养基中,在25-30℃、180-250r/min条件下培养8-

11d获得发酵液;

(2)粗提物的获得

将步骤(1)制备的发酵液真空旋转蒸发浓缩至发酵液体积的1/10,用等体积的氯仿反复萃取浓缩液去掉氯仿层留下水层,将水层进行层析,然后进行梯度洗脱,收集100%甲醇洗脱液,真空旋转蒸发至干,得粗品;

(3)复合物的制备

将步骤(2)制备的粗品溶解到超纯水中进行葡聚糖凝胶G-25层析,在316min时出现单峰并对此峰进行收集,将收集液冷冻干燥得到复合物。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述的层析为:先将水层进行

732阳离子交换树脂层析,再进行AB-8大孔树脂层析。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述层析的具体操作为称取200g的

732阳离子交换树脂放到层析柱中,先用2L的超纯水平衡层析柱,然后将水层缓慢地加入到层析柱中,调节流速5-10滴/s收集流出液;将收集的流出液进行AB-8大孔树脂层析:称取

100g AB-8树脂于层析柱中,用2L超纯水平衡层析柱,然后将样品缓慢地加入到层析柱中。

6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述梯度洗脱具体的操作为用超纯水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇进行梯度洗脱。

7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述葡聚糖凝胶G-25层析,所用到的仪器为HP PLUS 10D蛋白纯化仪,所述蛋白仪具体操作参数为:(1)平衡:平衡2个柱体积,流速设置为5mL/min;

(2)进样:进样2mL,流速设置为0.5mL/min;

(3)洗脱:洗脱3个柱体积,流速设置为0.5mL/min;

(4)冲洗:冲洗3个柱体积,流速设置为5mL/min。

8.一种权利要求1或2所述的复合物在抑制金黄色葡萄球菌生长中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,具体方法如下:(1)将金黄色葡萄球菌预先活化两代后再接种到液体培养基中,在37℃条件下培养6-

8h,作为测试菌菌液;

(2)用复合物配制溶液装入试管;

(3)在步骤(2)制备复合物溶液试管中,加入步骤(1)制备的测试菌0.2ml,充分混匀,另做两个对照管;其中所述对照管一个只含复合物不含测试菌,另一个对照管只含测试菌不含复合物;

(4)将步骤(3)所述的试管均置于37℃恒温箱中培养24h,取出试管,充分振荡,用肉眼观察各试管的浑浊度,如某管培养液与对照管一同样透明,则表明测试菌的生长被抑制。

10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述液体培养基为pH 7.4-7.6,

121℃灭菌20min;由以下重量组分的原料组成:NaCl 10g,蛋白胨10g,酵母浸粉5g,蒸馏水

1L。