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专利号: 2018114141291
申请人: 连云港市农业科学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:该方法步骤如下:a、子房选取标记:在田间选取生长粗壮、性状外观表现无病毒病及其它病虫害的百合植株采摘花苞,带回花苞、取出完整的子房并对每个子房进行标记;

b、子房的病毒检测:从标记好的子房底部切取长度为4‑7mm的子房,采用多重RT‑PCR方法对切取的子房进行百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒的检测,无毒子房放入冰箱暂置;

c、子房预处理:经低温处理的子房用流水冲洗后消毒灭菌、再用无菌水冲洗,用手术刀把子房竖切为两部分并皆放置于预处理培养基中培养18‑25d,预处理培养基的配方为:MS+

12mg/LPicloram+6.5g/L琼脂+15g/L蔗糖,该培养基的pH=5.8;

d、子房诱导愈伤培养:用手术刀把预培养后子房内的膨大胚珠去除掉,然后横切成2mm的切块放置在诱导培养基中培养65‑80d,诱导培养基的配方为:MS+8mg/LPicloram+5mg/L6‑BA+6.5g/L琼脂+30g/L蔗糖,该培养基的pH=5.8;

e、诱导转化成球:把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上,成芽培养基配方为:1/2MS+

0.2mg/LNAA+6.5g/L琼脂+30g/L蔗糖,暗培养1‑2个月后继代扩繁一次,3‑4个月后即可得到直径为0.3‑2cm的百合小鳞茎,即为百合无毒种球;

所述步骤(c)中的子房预处理详细步骤为:(c1)经低温处理的子房用流水冲洗0.5‑2小时;

(c2)流水冲洗后采用75%的酒精浸泡30‑40s后放入0.1%‑0.2%的升汞中7‑9min;

(c3)消毒灭菌后采用无菌水冲洗4‑6次;

(c4)把经步骤(c1)‑(c3)处理的子房底部和顶端切除,最后用手术刀把子房竖切为两部分并皆放置于预处理培养基中培养18‑25d。

2.根据权利要求1所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:所述步骤(a)中的子房选取标记的详细步骤为:(a1)寻找在田间正常生长至花苞长度为7‑10cm且花苞未着色、未开裂的百合植株;

(a2)在步骤(a1)中确定的百合植株内选取生长粗壮、性状外观表现无病毒病及其它病虫害的百合植株,采摘花苞并放置在内置冰块的冰盒中;

(a3)花苞带回后,取出完整的子房并对每个子房进行标记。

3.根据权利要求1所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:所述步骤(b)中的多重RT‑PCR方法检测显示有病毒的切取的子房全部高温灭杀扔掉。

4.根据权利要求1或3所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:所述步骤(b)中的多重RT‑PCR方法检测显示无病毒的切取的子房放入温度为0‑4℃的冰箱暂置7‑

10d。

5.根据权利要求1所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于所述步骤(c)中的预处理培养基的培养条件为:光暗培养时间为12h/12h、培养温度为23‑26℃。

6.根据权利要求1所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:所述步骤(d)中的子房诱导愈伤培养的处理过程为:在无菌条件下,用手术刀把预培养后子房内的膨大胚珠去除掉,然后横切成2mm的切块并按子房生长极性,底部接触培养基的方式放置在诱导培养基中,在25‑28℃条件下黑暗培养65‑80d,使其诱导出淡黄色的胚性愈伤组织。

7.根据权利要求1或6所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:所述步骤(d)中的子房诱导愈伤培养的过程中,需要每隔22‑25d转接一次。

8.根据权利要求1所述的规模化繁育无病毒百合籽球的方法,其特征在于:所述步骤(e)中的百合小鳞茎进行脱毒处理后随机抽取10%‑20%的比例进行RT‑PCR反转录病毒检测,经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒,即为百合无毒种球。