1.一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)包埋型高活性微生物的制备:
a. 将伯克霍尔德氏菌CGMCC NO:6269接种到改良LB液体培养基中,经活化培养得种子液;
b. 取5 10μL种子液接种到200 400mL改良LB液体培养基中,经摇菌培养得伯克霍尔德~ ~氏菌菌液,在摇菌培养的同时进行特定频率的声波处理;
c. 先将操作b中所得的伯克霍尔德氏菌菌液置于离心机中进行离心,收集沉淀风干至含水率3 7%后得菌粉备用;
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d. 将瓜尔胶和寡糖按照重量比为2 3:0.7 0.9共同投入到摩尔浓度为3 9moL/L的三~ ~ ~(羟甲基)氨基甲烷溶液中,不断搅拌直至瓜尔胶和寡糖完全溶解;
e. 先将操作c所得的菌粉和操作d所得的溶液按照重量比为0.8 1:2 3共同投入搅拌~ ~罐内,以150 180rpm的转速搅拌混匀后,用一次性滴管吸取溶液,然后滴入到质量分数为10~
12%的氯化钙溶液中,形成凝胶球后放入6 10℃的环境中,低温放置1 1.5h后取出凝胶球,~ ~ ~再用去离子水反复冲洗去除未包埋的伯克霍尔德氏菌,滤干即得包埋型高活性微生物;
(2)原料称取:
称取相应重量份的步骤(1)所得的包埋型高活性微生物34 42份、腐殖酸23 27份、活性~ ~炭16 20份、煤灰12 16份、沸石6 9份备用;
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(3)成品制备:
将步骤(2)中称取的所有原料投入搅拌罐内,以700 900rpm的转速进行搅拌,搅拌的同~时进行特定频率的微波活化处理,搅拌处理1 2h即可。
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2.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)操作a或操作b中改良LB液体培养基的制备,包括如下步骤:
1)称取相应重量份的胰蛋白胨7 9份、酵母提取物3 5份、氯化钠3 5份、复合粉3 4份、~ ~ ~ ~纯化水120 160份备用;
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2)先将步骤(1)称取的纯化水置于玻璃烧杯中,利用磁力搅拌器进行搅拌,同时进行加热,然后等到纯化水中的温度升至70 80℃时,将步骤1)中称取的胰蛋白胨、酵母提取物、氯~化钠、复合粉依次加入烧杯中,边搅拌边加入,再继续加热保持混合液中的温度为95 99℃,~保持95 99℃搅拌处理20 30min后停止加热;
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3)将步骤2)所得的混合液置于高温高压灭菌锅内进行灭菌处理,灭菌温度为118 124~℃,灭菌的时间为23 29min,取出冷却至室温即可。
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3.根据权利要求2所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤1)中复合粉的制备方法是将碳酸铈和纳米碳管按照重量比2.3 2.7:0.7 0.9共同浸入改~ ~性液中进行浸泡,浸泡时保持改性液中的温度为70 80℃,改性的同时用频率为45 55kHz的~ ~超声波进行处理,50 70min后取出离心得滤渣备用;所述改性液中各成分及其对应重量份~为:10 20份甘油、7 9份氨水、0.4 0.6份甲基丙烯酸甲酯、4 5份硅烷偶联剂、2 4份硫酸铵、~ ~ ~ ~ ~
70 80份无菌水。
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4.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)操作a中伯克霍尔德氏菌的接种量为每1 3mL改良LB液体培养基中接种1 3μL伯克霍~ ~尔德氏菌菌种。
5.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)操作a中种子液的OD600值为0.3 0.7。
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6.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)操作b中伯克霍尔德氏菌菌液的OD600值为0.9 1.3。
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7.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)操作b中声波处理时声波的频率为13 19kHz。
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8.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)操作c中离心机的转速为5000 8000rpm。
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9.根据权利要求1所述一种高活性微生物土壤修复剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中微波活化处理时微波的频率控制为20 30GHz。
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