1.一种改进的氰基还原酶,其特征在于:所述改进的氰基还原酶是以SEQ ID No.2所示氨基酸序列为出发序列,将第120位丙氨酸突变为亮氨酸,并将第155位的谷氨酸突变为赖氨酸得到的突变体,氨基酸序列为SEQ ID No.4所示。
2.一种改进的氰基还原酶,其特征在于:所述改进的氰基还原酶,包括,以SEQ ID No.2所示氨基酸序列为出发序列,将第59位酪氨酸突变为丙氨酸,第120位的丙氨酸突变为亮氨酸,第155位的谷氨酸突变为赖氨酸,第211位的谷氨酸突变为精氨酸,氨基酸序列为SEQ ID No.6所示。
3.一种改进的氰基还原酶,其特征在于:所述改进的氰基还原酶,包括,以SEQ ID No.2所示氨基酸序列为出发序列,将第59位酪氨酸突变为丙氨酸,第75位的甘氨酸突变为脯氨酸,第120位的丙氨酸突变为亮氨酸,第137位的苏氨酸突变为丝氨酸,第155位的谷氨酸突变为赖氨酸,第169位的丙氨酸突变为苏氨酸,第211位的谷氨酸突变为精氨酸,氨基酸序列为SEQ ID No.8所示。
4.权利要求1 3中任一所述的改进的氰基还原酶在催化2‑氯‑3‑氰基吡嗪发生还原反~
应生成3‑氯吡嗪‑2甲胺中的应用。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于:所述的改进的氰基还原酶在催化2‑氯‑3‑氰基吡嗪发生还原反应生成3‑氯吡嗪‑2甲胺中的应用是在pH6 8的磷酸钾缓冲液中,分别添~
加葡萄糖、辅酶NADP、2‑氯‑3‑氰基吡嗪、葡萄糖脱氢酶以及权利要求1 3任一所述改进的氰~
基还原酶组成反应混合液,进行还原反应生成3‑氯吡嗪‑2甲胺。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于:所述进行还原反应生成3‑氯吡嗪‑2甲胺,反应温度为30 40℃,反应时间为24 h。
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7.如权利要求5所述的应用,其特征在于:所述反应混合液,其中葡萄糖浓度为25 50 ~
g/L、辅酶NADP浓度为3 7 mg/L、2‑氯‑3‑氰基吡嗪浓度为20 50 mmol/L、葡萄糖脱氢酶的浓~ ~
度为2 4 g/L、氰基还原酶的浓度为0.6 1.4 g/L、磷酸钾缓冲液的浓度为50 100 mmol/L。
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8.如权利要求7所述的应用,其特征在于:所述反应混合液,其中葡萄糖浓度为50 g/L、辅酶NADP浓度为7 mg/L、2‑氯‑3‑氰基吡嗪浓度为50 mmol/L、葡萄糖脱氢酶的浓度为4 g/L、氰基还原酶的浓度为1.4 g/L。