1.一种蕙兰种子无菌萌发方法,其特征在于该方法由下述步骤组成:
(1)种子的处理
选择授粉后胚龄18~24周且发育饱满的蕙兰果荚,装入牛皮袋中阴干后埋在细沙中,在4~20℃干燥、避光处保存处理4~16周,然后将蕙兰果荚用无菌水冲洗3~5次洗去表面杂物,剥开蕙兰果荚倒出种子,在无菌条件下用体积浓度为75%的乙醇水溶液消毒处理种子0.5~3min,用无菌水冲洗3~5次,再加入体积浓度为0.1%~0.2%的升汞水溶液消毒处理5~10min,用无菌水冲洗3~5次,得到消毒处理后的种子;将消毒处理后的种子浸泡于
0.1~2.0mg/L赤霉素GA3水溶液,放入摇床中在20℃~30℃条件下振荡处理24~72h;
(2)播种与培养
在无菌条件下将步骤(1)中处理好的种子与赤霉素GA3水溶液混合物播种到无菌萌发培养基上,放置于20~30℃、光照强度3000lx、光照8h/天的人工智能培养箱内培养;
上述无菌萌发培养基是:以MS培养基为基础培养基,加入0.1~2.0mg/L萘乙酸、0.1~
2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、2~10g/L活性炭,调整pH至5.5~6.5,115~121℃高压灭菌15~
25min,在培养基冷却到40~60℃时加入0.1~2.0mg/L赤霉素GA3混匀,冷却凝固。
2.根据权利要求1所述的蕙兰种子无菌萌发方法,其特征在于:步骤(1)中,在无菌条件下用体积浓度为75%的乙醇水溶液消毒处理种子0.75~1min,用无菌水冲洗3~5次,再加入体积浓度为0.1%~0.2%的升汞水溶液消毒处理7~8min,用无菌水冲洗3~5次,得到消毒处理后的种子。
3.根据权利要求1或2所述的蕙兰种子无菌萌发方法,其特征在于:步骤(1)中,将消毒处理后的种子浸泡于0.5~1.5mg/L赤霉素GA3水溶液,放入摇床中在20℃~30℃条件下振荡处理36~48h。
4.根据权利要求1所述的蕙兰种子无菌萌发方法,其特征在于:步骤(2)中,所述的无菌萌发培养基是:以MS培养基为基础培养基,加入0.5~1.0mg/L萘乙酸、0.5~1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、3~5g/L活性炭,调整pH至5.8~6.0,121℃高压灭菌20min,在培养基冷却到45~50℃时加入0.5~1.0mg/L赤霉素GA3混匀,冷却凝固。