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专利号: 2018109825830
申请人: 深圳市菲鹏生物制药股份有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种亲和层析填料的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:在相同的流速、保留时间下,将含有单克隆抗体的上样液分别连续上样到多个亲和层析柱中,使每个所述亲和层析柱过载,每个所述亲和层析柱中含有一种亲和层析填料,且至少有两个所述亲和层析柱中的亲和层析填料不同;

将各个所述亲和层析柱的流穿液按照穿透的先后顺序分装为多个待测液;

检测各个所述待测液中所述单克隆抗体的浓度;

根据所述待测液中所述单克隆抗体的浓度,确定各种亲和层析填料对所述单克隆抗体的动态结合能力;及根据所述动态结合能力筛选所述亲和层析填料。

2.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,加入到每个所述亲和层柱中的所述上样液的体积与该上样液中所述单克隆抗体的质量浓度之积大于所述亲和层析填料的固有载量与该亲和填料的体积之积。

3.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述检测每个所述待测液中所述单克隆抗体的浓度的步骤包括:分别将各所述亲和层析填料装填到多孔过滤板上,用平衡液平衡各所述亲和层析填料,得到微孔层析板;

分别将各所述亲和层析柱的多个所述待测液等体积加到所述微孔层析板对应的孔中,得到多个待孵育液;

将各所述待孵育液孵育、离心洗脱,得到多个洗脱液;及

检测各所述洗脱液中所述单克隆抗体的浓度,得到各所述待测液中所述单克隆抗体的浓度。

4.根据权利要求3所述的筛选方法,其特征在于,所述将各所述待孵育液孵育、离心洗脱,得到多个洗脱液的步骤包括:将各所述待孵育液孵育、离心,得到多个离心液;

检测各个所述离心液中的所述单克隆抗体的浓度,若所述离心液中的所述单克隆抗体的浓度与所述上样液中所述单克隆抗体的浓度的比值大于5%,则将所述离心液再次加入至所述微孔层析板对应的孔中进行孵育,然后离心、检测所述单克隆抗体的浓度,直至每个所述离心液中的所述单克隆抗体的浓度与所述上样液中所述单体隆抗体的浓度的比值不大于5%,得到吸附有所述单克隆抗体的微孔层析板;及用洗脱缓冲液清洗所述吸附有所述单克隆抗体的微孔层析板,得到多个所述洗脱液。

5.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述上样液含有相同浓度的所述单克隆抗体,所述根据所述待测液中所述单克隆抗体的浓度,确定每种所述亲和层析填料对所述单克隆抗体的动态结合能力的步骤包括:计算每个所述待测液对应的上样总体积;及

计算每个所述待测液中所述单克隆抗体的浓度与所述上样液中所述单克隆抗体的浓度的比值,在相同的所述比值下,所述上样总体积大的亲和层析填料的动态结合能力大。

6.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,每个所述亲和层析柱的多个所述待测液中,至少一个所述待测液的所述单克隆抗体的浓度与所述上样液中的单克隆抗体的浓度的比值处于0.05~0.15之间。

7.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述上样液为含有所述单克隆抗体的发酵液上清。

8.根据权利要求1~7中任一项所述的筛选方法,其特征在于,在所述在相同的流速、保留时间下,将含有单克隆抗体的上样液分别连续上样到多个亲和层析柱中,使每个所述亲和层析柱过载的步骤之前,还包括以下步骤:确认每种所述亲和层析填料对所述单克隆抗体的静态结合能力。

9.根据权利要求8所述的筛选方法,其特征在于,所述确认每种所述亲和层析填料对所述单克隆抗体的静态结合能力的步骤包括:将所述单克隆抗体配置成不同浓度的上样样品;

分别将各所述亲和层析填料等体积装填到多孔过滤板上,用亲和层析平衡液平衡每种所述亲和层析填料,得到微孔层析板;

分别将不同浓度的所述上样样品等体积加到所述微孔层析板上,并进行孵育、离心、收集上清液,检测所述上清液中的所述单克隆抗体的浓度;及根据每种所述亲和层析填料的上清液中所述单克隆抗体浓度,确认每种所述亲和层析填料对所述单克隆抗体的静态结合能力。

10.根据权利要求9所述的筛选方法,其特征在于,采用梯度稀释法将所述单克隆抗体配置成不同浓度的上样样品。