1.芽孢形成相关基因sigmaF在产酶中的应用，其特征在于，步骤如下：(1)提取克劳氏芽孢杆菌的基因组DNA，以基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得克劳氏芽孢杆菌芽孢形成相关基因sigmaF，所述基因sigmaF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)以pHT01质粒为模板，经PCR扩增获得Cmr片段，所述Cmr片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

(3)采用重叠PCR技术将步骤(1)获得的基因sigmaF与步骤(2)获得的Cmr片段进行融合，制得融合基因sigmaF-Cmr，所述融合基因sigmaF-Cmr的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

r

(4)将步骤(3)制得的融合基因sigmaF-Cm经酶切后，浓缩，转化克劳氏芽孢杆菌感受态细胞，经筛选得阳性重组菌，即可应用于产酶；所述浓缩后的融合基因sigmaF-Cmr的浓度为

300～500ng/μL；

所述产酶为产纤维素酶，纤维素酶的酶活为出发菌株的3～4倍。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增的引物核苷酸序列如下，下划线为BamH Ⅰ酶切位点：sigmaF-F：CGCGGATCCATGAGTGCAGAGGTGAAAAACAGCGG，sigmaF-R：GTGAGCAAAAGGCCAGCAAAATGAGTGGTCGGCAAT；

PCR扩增体系如下，总体积50μL：

2×HiFi-PCR Master 25μL，上游引物sigmaF-F 2.5μL，下游引物sigmaF-R 2.5μL，克劳氏芽孢杆菌基因组DNA 2.5μL，ddH2O 17.5μL；

PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min15s，共30个循环；72℃继续延伸10min。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增的引物核苷酸序列如下，下划线为BamHⅠ酶切位点：Cmr-F：CTTGTAGGAACGCTTTTTGCTGGCCTTTTGCTC，Cmr-R：CGCGGATCCTAGTGACTGGCGATGCTGTCGGAATGG；

PCR扩增体系如下，总体积50μL：

2×HiFi-PCR Master 25μL，上游引物Cmr-F 2.5μL，下游引物Cmr-R 2.5μL，pHT01质粒

2.5μL，ddH2O 17.5μL；

PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min45s，共30个循环；72℃继续延伸10min。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述重叠PCR的扩增引物核苷酸序列如下，下划线为BamH Ⅰ酶切位点：sigmaF-F：CGCGGATCCATGAGTGCAGAGGTGAAAAACAGCGG，Cmr-R：CGCGGATCCTAGTGACTGGCGATGCTGTCGGAATGG；

第一轮重叠PCR扩增体系如下，总体积25μL：r

2×HiFi-PCR Master 12.5μL，基因sigmaF 2μL，Cm片段2μL，ddH2O 8.5μL；

第一轮重叠PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min40s，5个循环；72℃继续延伸10min；

第二轮重叠PCR扩增体系为在第一轮PCR扩增体系的基础上补加如下试剂：

2×HiFi-PCR Master 12.5μL，上游引物sigmaF-F 1μL，下游引物Cmr-R 1μL，ddH2O 

10.5μL；

第二轮重叠PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸4min，共30个循环；72℃继续延伸10min。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，所述酶切的反应体系如下，总体积40μL：重叠PCR产物20μL，10×K Buffer 4μL，BamH Ⅰ内切酶2μL，ddH2O 14μL；

酶切条件为：37℃，1.5h。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，所述劳氏芽孢杆菌感受态细胞的制备方法如下：挑取新鲜的克劳氏芽孢杆菌单菌落，37℃，220r/min培养至菌体浓度OD600＝0.9～1.0，置于冰上冷却，冷却后离心，然后用预冷的电转缓冲液洗涤菌体3～5次，电转缓冲液重悬菌体后分装至预冷的无菌EP管，制得克劳氏芽孢杆菌感受态细胞；

其中，所述电转缓冲液的组分如下：

质量百分比为9.1％的山梨醇，质量百分比为9.1％的甘露醇，体积百分比为10％的甘油，余量水。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，所述转化克劳氏芽孢杆菌感受态细胞，步骤如下：将经酶切浓缩后的融合基因sigmaF-Cmr电转化克劳氏芽孢杆菌感受态细胞，电转化的电压为1500～1800V，电击时间为4～5ms，然后在37℃条件下于液体复苏培养基中培养3～

4h，即得；

其中，所述液体复苏培养基组分如下，均为重量百分比：蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠1％，山梨醇9％，甘露醇7％，pH＝7.0～7.4。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，所述筛选步骤如下：将转化后的克劳氏芽孢杆菌感受态细胞涂布含氯霉素的LB平板，37℃培养12～24h，然后经菌落PCR进行转化子鉴定，筛选获得阳性重组菌；

其中，所述含氯霉素的LB平板为氯霉素浓度为25μmol/mL的LB固体培养基。