1.用于还原二价汞离子的生物工程菌,其特征在于,所述生物工程菌含有表达载体,该表达载体为merR op‑ompA‑merA‑pSB1A2,其包括重组基因merR op‑ompA‑merA和pSB1A2质粒骨架,merR的基因序列如SEQ ID NO.1所示,op的基因序列如SEQ ID NO.2所示,ompA的基因序列如SEQ ID NO.3所示,merA的基因序列如SEQ ID NO.4所示,所述生物工程菌为大肠杆菌。
2.如权利要求1所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、利用PCR扩增反应分别实现merR op、ompA、merA基因片段的扩增,将扩增后的merR op基因片段和ompA基因片段通过重叠延伸PCR技术连接,并通过PCR扩增反应实现扩增,得到目的基因片段merR op‑ompA;
步骤二、使用限制性内切酶XbaI和SpeI对pSB1A2质粒骨架和目的基因片段merR op‑ompA进行双酶切,使目的基因片段merR op‑ompA和pSB1A2质粒骨架同时露出相同的粘性末端,通过T4 DNA连接酶将目的基因片段merR op‑ompA和pSB1A2质粒骨架连接,实现merR op‑ompA‑ pSB1A2质粒的构建;
步骤三、使用限制性内切酶SpeI对merR op‑ompA‑ pSB1A2质粒和扩增后的merA基因片段进行单酶切,再用T4 DNA连接酶将merR op‑ompA‑ pSB1A2质粒和扩增后的merA基因片段连接,完成表达载体merR op‑ompA‑ merA‑pSB1A2的构建;
步骤四、通过化学转化法将表达载体merR op‑ompA‑ merA‑pSB1A2转化至感受态细胞内,获得所述生物工程菌。
3.如权利要求2所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,步骤一中的目的基因片段merR op‑ompA具体通过以下方法获得:分别以全合成的merR op、ompA、merA基因序列为模板,进行第一次PCR扩增反应,再将扩增后的merR op和ompA基因片段末端的互补片段通过重叠延伸PCR技术实现merR op和ompA的连接,得到连接片段merR op‑ompA,进行第二次PCR扩增反应,实现连接片段merR op‑ompA的扩增,得到目的基因片段merR op‑ompA。
4.如权利要求2所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,步骤四中的感受态细胞为E.coli DH5α感受态细胞。
5.如权利要求3所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,第一次PCR扩增反应时,merR op需要加入的引物包括IMerR‑OP XF、OP‑ompA UP,ompA需要加入的引物包括OP‑ompA DN、OmpA SR,merA需要加入的引物包括MerA SF、MerA SR;第二次PCR扩增反应加入的引物包括IMerR‑OP XF和OmpA SR;
IMerR‑OP XF的序列为:GTAGTTCTAGATTACGGCATAGCAGAACCAG;
OP‑ompA UP的序列为:AATTTCAATTCGAAAGGACAAGCGCATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTG;
OP‑ompA DN的序列为:CAATCGCGATAGCTGTCTTTTTCATGCGCTTGTCCTTTCGAATTGAAATT;
OmpA SR的序列为:GTAGTACTAGTGGATCCTCCGTTGTCCG;
MerA SF的序列为:GTAGTACTAGTATGACCCATCTGAAAATTACCG;
MerA SR的序列为:GTAGTACTAGT TTAACCGGCACAACAGCT。
6.如权利要求2所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,步骤二中进行双酶切时的反应温度为37°C,反应时间为1 h。
7.如权利要求2所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,步骤三中进行单酶切时的反应温度为37°C,反应时间为1 h。
8.如权利要求3所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的制备方法,其特征在于,第一次PCR扩增反应包括30个循环,其中,一个循环依次包括98°C变性10 s、55°C退火10 s、
72°C延伸5 s;第二次PCR扩增反应包括30个循环,其中,一个循环依次包括98°C变性10 s、
55°C退火10 s、72°C延伸10 s。
9.如权利要求1所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的用途,其特征在于,所述生物工程菌用于在水环境中治理Hg(II)污染。
10.如权利要求9所述的用于还原二价汞离子的生物工程菌的用途,其特征在于,所述该生物工程菌投入具有Hg(II)污染的水环境中,将Hg(II)还原为Hg(0),实现水环境的治理。