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专利号: 2018103233938
申请人: 新乡医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-12-10
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种通过冷冻干燥浓缩质粒的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1.按照小提质粒试剂盒要求提取质粒,菌液收集量3‑5mL,最终用100μLddH2O洗脱到经过121℃,30min高压蒸汽灭菌处理的1.5mL EP管中;如果洗脱液大于100μL,冻干时低压沸腾过程会溅出封口膜,需分装,使最终每个1.5mLEP管中溶液体积≤100μL;

步骤2.使用超微量分光光度计NANO DROP测量质粒浓度,记录单位为ng/μL;测量过后盖好盖子放置‑20℃冰箱冷冻处理1‑2h;提前打开真空冷冻干燥机,使冷阱温度下降至‑55℃;

步骤3.将冷冻处理好的质粒移至超净工作台,打开盖子封上一层封口膜,并将其余部分包裹好,用牙签在封口膜上戳开3‑4个小洞,冷阱温度下降至‑55℃,立即放入冷冻干燥机中,密封好干燥箱,关闭通气阀门,打开真空泵,使干燥箱中压强达到15Pa,冷冻干燥6h;

步骤4.6h之后取出,掀掉封口膜,盖上盖子,拿到超净工作台中,用定量的ddH2O重溶同一种质粒,保证双蒸水充分接触到干燥后质粒液体形成的一层薄膜,且完全将该薄膜溶解;

溶解后标记号,用超微量分光光度计NANO DROP测量质粒浓度,记录单位为ng/μL;并记录参数OD260/OD280;参数OD260/OD280=1.8;

步骤5.对比冷冻干燥前后质粒体积、浓度和质量的变化,整理数据,统计前后质粒浓度体积变化的规律。