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专利号: 2018102342143
申请人: 黑龙江中医药大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-05-17
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于对刺五加种子进行内生真菌Alternaria alternata浸种处理和变温层积处理,包括以下步骤:(1)种子的获取:采集刺五加黑紫色的成熟果实,放入容器中,加入少量水,等待果实软化后,平铺在地表进行踏踩,使种肉分离,再放入容器中加水多次进行淘洗,倒出果肉以及瘪粒的种子,捞出容器底部的刺五加种子晒干待用;

(2)种子消毒:将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后,用清水冲洗净,再用清水浸泡24h,使种子吸水饱和,取出后沥干水分,所述次氯酸钠的浓度为5-8%,所述次氯酸钠的浸种时间为5-15min,所述清水冲洗次数为3-5次;

(3)刺五加内生真菌浸种培养:将刺五加内生真菌Alternaria alternata接种在液体培养基上,在摇床上摇7天,取刺五加种子,用75%酒精浸泡20-40s,用无菌水冲洗3-5次,5-

8%次氯酸钠处理5-15min,再用无菌水冲洗3-5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇24-48h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,用75%酒精浸泡20-40s,用无菌水冲洗3-5次,5-8%次氯酸钠处理5-

15min,再用无菌水冲洗3-5次,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶1-5混匀;

(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子,用酒精和次氯酸钠溶液对种子进行浸泡消毒,用

75%酒精浸泡20-40s,用无菌水冲洗3-5次,5-8%次氯酸钠处理5-15min,再用无菌水冲洗

3-5次,再次用刺五加内生真菌Alternaria alternata悬液浸种共生3-7天,用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒,用75%酒精浸泡20-40s,用无菌水冲洗3-5次,5-

8%次氯酸钠处理5-15min,再用无菌水冲洗3-5次;

(5)种子解除休眠:将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中,种子与湿河沙按体积比1∶1-5混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度50-

70%,缺水时适量浇水,水中加1%新洁尔灭,刺五加种子变温层积:第一阶段:温度保持在

20-25℃,时间为10周,每日翻动一次;第二阶段:刺五加种子温度保持在10-15℃,时间为6周,2-3天翻一次;第三阶段:刺五加种子温度保持在0-5℃,时间为9周;

(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子,置于室温培养箱下培养。

2.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于,所述步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为10-20:1,所述淘洗次数为5-10次。

3.根据权利要求2所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于,所述步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为10:1,所述淘洗次数为10次。

4.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于,所述步骤(2)中次氯酸钠的浓度为5%,所述次氯酸钠的浸种时间为10min,所述清水冲洗次数为5次。

5.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,酒精浸泡时间为30s,使用无菌水冲洗3次,5%次氯酸按处理10min,再用无菌水冲洗

5次,将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中,继续摇36h,120rpm,随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒,用75%酒精浸泡30s,用无菌水冲洗3次,5%次氯酸钠处理10min,再用无菌水冲洗5次,消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里,并及时补充水分,所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。

6.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于,所述步骤(4)中使用刺五加内生真菌Alternaria alternata悬液浸种共生6天。

7.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法,其特征在于,所述步骤(5)中种子与湿河沙按体积比1∶2混匀,装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽,保持湿度

60%。