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专利号: 201711373010X
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种具有抗肿瘤活性的三元复合毒素,其特征在于,其编码基因来源于昆虫病原线虫共生致病杆菌Xenorhabdus stockiae HN_xs01,为xsrfABC基因,xsrfABC基因包含三个开放阅读框:xsrfA、xsrfB和xsrfC,xsrfA的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,xsrfB的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示,xsrfC的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的三元复合毒素,其特征在于,xsrfA基因编码的蛋白氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示,xsrfB基因编码的蛋白氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示,xsrfC基因编码的蛋白氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示。

3.根据权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的三元复合毒素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:首先我们提取了Xenorhabdus stockiae HN_xs01的基因组,构建了基因组fosmid文库,筛选对Hela细胞具有毒性的克隆子,对克隆子进行测序分析,将xsrfABC基因克隆获得表达载体pSC101-BAD-xsrfABC,将表达载体转化入GB05,得到重组菌株GB05,诱导表达XSrfABC毒素。

4.根据权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的三元复合毒素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:分别构建了XSrfA、XSrfB和XSrfC的原核表达载体,诱导表达复合毒素的各组分,并利用亲和层析纯化毒素蛋白,将三种组分混合。

5.根据权利要求4所述的具有抗肿瘤活性的三元复合毒素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:PCR分别扩增xsrfA、xsrfB和xsrfC基因片段,并克隆到表达质粒pGEX-4T-2,获得三个重组质粒:pGEX-4T-srfA,pGEX-4T-srfB,pGEX-4T-srfC;

将三个重组质粒分别电转至E.coli BL21中,获得重组菌株BL21-SrfA、BL21-SrfB、BL21-SrfC;三种重组菌株经IPTG诱导后,均表达可溶性的目的蛋白;将三种可溶性表达蛋白的菌体上清用0.22μm滤膜过滤,用清洗缓冲液清洗GST琼脂糖树脂,加入蛋白裂解液,加入5倍柱体积的洗涤缓冲液洗脱蛋白,重复洗脱一次,加入2倍柱体积Elution buffer洗脱,收集蛋白,将分别表达再收集的三种蛋白混合。

6.如权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的三元复合毒素在制备抗肿瘤药物方面的应用。

7.如权利要求3或4所制备的具有抗肿瘤活性的三元复合毒素在制备抗肿瘤药物方面的应用。