1.一种乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR引物和探针,其特征在于包含雌激素受体α66基因引物、孕激素受体基因引物、人类表皮生长因子受体2基因引物,其核苷酸序列分别如下所示:ER-α66-F:CATGGTGGAGATCTTCGA;
ER-α66-R:GTGCTGGACAGAAATGTG;
PR-F:ACCACGGTGATGGATTTC;
PR-R:CGTCGTAACTTTCGTCTTC;
Her2-F:CTTCCACAAGAACAACCA;
Her2-R:CTGACAATCCTCAGAACTC;
还包含雌激素受体α66基因探针、孕激素受体基因探针和类表皮生长因子受体2基因探针,其核苷酸序列分别如下所示:ER-α66-probe:CTGCTGGCTACATCATCTCGGT;
PR-probe:CGTGCCTATCCTGCCTCTCA;
Her2-probe:ACACTGATAGACACCAACCGCT。
2.一种乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR快速检测试剂盒,其特征在于该试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针。
3.根据权利要求2所述的乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR快速检测试剂盒,其特征在于还包含β-actin基因引物和探针,其核苷酸序列分别如下所示:β-actin-F:TGCAGAAGGAGATCACTG;
β-actin-R:CTTGCTGATCCACATCTG;
β-actin-probe:AAGATCAAGATCATTGCTCCTCCTGA。
4.根据权利要求3所述的乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR快速检测试剂盒,其特征在于:所述的雌激素受体α66基因探针、孕激素受体基因探针、类表皮生长因子受体2基因探针和β-actin基因探针的荧光标记分别为:FAM、VIC、Cy5和YAK。
5.根据权利要求2所述的乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR快速检测试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒还包括2×RT-PCR Buffer和25×RT-PCR Enzyme。
6.根据权利要求2所述的乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR快速检测试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。
7.权利要求1所述的乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR引物和探针与权利要求2~6任一项所述的试剂盒在制备检测乳腺癌分子分型产品中的应用。
8.一种乳腺癌分子分型方法,其特征在于包含如下步骤:(1)提取待测样品RNA;
(2)配制RT-PCR反应体系:步骤(1)制得的RNA 10μl,2×RT-PCR Buffer 12.5μl,25×RT-PCR Enzyme Mix 1μl,权利要求2~7任一项所述的试剂盒中引物/探针组合1.5μl,其中,模板终浓度为5μM,各引物/探针终浓度为0.5μM;
(3)进行RT-PCR反应;
(4)根据扩增曲线Ct值,判断雌激素受体-α66基因、孕激素受体基因、人类表皮生长因子受体2基因表达情况;如某种受体基因相应的荧光信号产生指数Ct值小于33,则为阳性,否则为阴性;
所述的方法不包含疾病的治疗与诊断目的。
9.根据权利要求8所述的乳腺癌分子分型方法,其特征在于:所述的RT-PCR反应的反应程序为:50℃保持15min,95℃保持10min;95℃维持8s,60℃维持34s,40个循环。