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专利号: 2017111821015
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-24
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,包括以下步骤:浓缩液制备:取培养后的小球藻藻液1L,离心10‑15分钟,去掉所得上清液,留沉淀;将沉淀用缓冲液重悬浮,重复离心3‑4次;将离心出的所有藻液进行合并,并用缓冲液稀释,终体积为200‑220mL,于0‑4℃温度下储存备用;所述缓冲液为pH为7.8‑7.9的Tris‑HCl缓冲溶液;

发酵:按照3.5‑5.0%接种经培养后的小球藻,发酵72‑96小时得发酵液;所述发酵过程中发酵温度为30‑33℃、pH为6.9‑7.2、搅拌速度为320‑340r/min、通气量0.65‑0.85vvm;

酶液制备:将发酵液在0‑4℃、3500‑5000r/min条件下离心10‑15分钟,将沉淀用缓冲液重悬浮后重复离心2‑3次,合并沉淀;将沉淀溶于缓冲液后用超声破碎仪破碎细胞,离心后留上清液,沉淀部分用缓冲液进行重悬浮,重复离心3‑5次合并上清液,低温浓缩至200‑

220mL后于0‑4℃保存备用;

配制:于3‑4℃条件下,将小球藻浓缩液与小球藻酶液按1:0.5‑3.0的体积混合,混合液密封后,置于装有冰水的三角瓶中,在20‑22℃、200‑220r/min条件下振荡混合10‑13分钟,以5‑6:1的体积添加稳定剂,即得生物表面活性剂;

所述酶液制备步骤中的超声破碎仪功率为1.0‑1.3kW,探头振幅为38‑45%,温度为2‑4℃,时间为30‑48分钟;

所述配置步骤中的稳定剂为18‑23%甘油、1.0‑1.5mM EDTA、0.1‑0.13mM DTT以及0.5μM(1S,2S,5S)‑2‑羟基蒎烷‑3‑酮,其pH为7.5‑7.7。

2.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述浓缩液制备步骤中的离心温度为0‑4℃,转速为3500‑5000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述发酵步骤中的发酵培养基组成及其含量为:葡萄糖38‑40g/L、玉米浆粉6‑8g/L、蛋白胨4‑

5g/L、NaCl 12.5‑15.0g/L、(NH4)2SO4 1.65‑1.70g/L、MgSO4·7H2O 2.2‑2.5g/L、KCl 0.5‑

0.6g/L、KH2PO4 0.5‑0.6g/L、CaCl2 0.1‑0.12g/L,121‑122℃条件下进行高压蒸汽灭菌15‑

30分钟。

4.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述酶液制备步骤中的离心温度为0‑4℃,转速为11500‑12000r/min,离心时间为15‑20分钟。