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专利号: 2017109348771
申请人: 南京晓庄学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种DNA条形码,其特征在于,所述DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的DNA条形码在鉴定圆叶葡萄和/或构建葡萄系统发育树中的用途。

3.一种制备如权利要求1所述的DNA条形码的核苷酸序列的方法,其特征在于,包括以下步骤:a.利用葡萄属18s rDNA、5.8s rDNA和28s rDNA的保守核苷酸序列设计引物;

b.提取圆叶葡萄的基因组DNA;

c.以步骤b提取的圆叶葡萄的基因组DNA为模板,利用步骤a设计的引物进行PCR扩增;

d.将步骤c得到的PCR扩增产物测序,然后利用测序结果进行序列拼接,得到DNA条形码的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述引物包括:Itb-5,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;

Itb-3,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;

Itc-5,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;

Itc-3,其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

5.根据权利要求3或4所述的制备方法,其特征在于,所述DNA条形码的核苷酸序列包括:部分18s rDNA、全部ITS1、全部5.8s rDNA、全部ITS2和部分28s rDNA的核苷酸序列。

6.一种用于鉴定圆叶葡萄的引物组,其特征在于,所述引物组包括基于权利要求1所述的DNA条形码设计的检测引物。

7.根据权利要求6所述的引物组,其特征在于,所述引物组包括如下所述检测引物:Itd-5,其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示;

Itd-3,其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示;

Ite-5,其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示;

Ite-3,其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

8.一种圆叶葡萄的分子鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取葡萄样本的基因组DNA;

(2)以步骤(1)提取的葡萄样本的基因组DNA为模板,利用如权利要求6或7所述的引物组进行PCR扩增;

(3)将步骤(2)得到的PCR扩增产物进行测序,然后将测序结果与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行比对,和/或将测序结果应用于构建葡萄的系统发育树。

9.根据权利要求8所述的分子鉴定方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应体系包括:PCR Mix(2X),12.5μL;

Forward Primer,10μM,0.5μL;

Reverse Primer,10μM,0.5μL;

ddH20,10.5μL。

10.根据权利要求8或9所述的分子鉴定方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应的反应条件为:94℃预变性10min;94℃变性45s,55℃退火45s,72℃延伸50s,共30个循环;72℃再延伸10min。

11.一种用于鉴定圆叶葡萄的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求6或7所述的引物组和/或权利要求9所述的反应体系。

12.包含权利要求1所述的DNA条形码的重组载体和/或转基因重组菌。