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专利号: 2017108835648
申请人: 南通大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产虫草素的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:制备蛹虫草原生质体硅质体:称取质量比为0.1~0.2:1~3的有机-无机复合脂质与蛹虫草原生质体;将有机-无机复合脂质溶于三氯甲烷中,蒸发除去三氯甲烷得到类脂质薄膜;蛹虫草原生质体悬浮于甘露醇水溶液中,然后加入到所得类脂质薄膜中,搅拌混匀并迅速加热到45~50℃,热激10~30s同时水浴超声,冷却至4℃后静置,经脂质体挤出器挤出,得到蛹虫草原生质体硅质体悬液;

步骤二:制备纳米纤维膜:取壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯溶解于乙酸水溶液中,加入甘油,再加入步骤一制得的蛹虫草原生质体硅质体悬液,搅拌混匀,通过静电纺丝制得纳米纤维膜,将其成卷填入层析柱中,层析柱中心留空;

步骤三:配制葡萄糖、核糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉和腺嘌呤的混合水溶液,经过滤除菌后,流经步骤二制备的层析柱,收集流出液,即得。

2.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤一中,所述蛹虫草原生质体通过如下步骤获得:步骤a:取蛹虫草菌体用无菌水洗涤,离心取沉淀;

步骤b:配制酶解液:分别取步骤a沉淀质量2~4%的溶壁酶、蜗牛酶、纤维素酶和崩溃酶,以质量体积比0.1:5~10g/mL加入到含有0.3~0.5mol/L KCl和0.2~0.4mol/L MgSO4的水溶液中,搅拌溶解,再经过滤除菌,制得酶解液;

步骤c:将步骤a得到的沉淀加入到步骤b得到的酶解液中,涡旋混匀,25~30℃下水浴酶解3~8h后,离心取沉淀即得蛹虫草原生质体。

3.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤一中,所述有机-无机复合脂质的结构式如下:

4.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤一中所述有机-无机复合脂质与三氯甲烷混合的质量体积比为100~200:10mg/mL;所述甘露醇水溶液的浓度为

100~180g/L,蛹虫草原生质体与甘露醇水溶液混合的质量体积比为1~3:10g/mL。

5.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤一中,所述脂质体挤出器采用聚碳酸酯滤膜,滤膜的孔径为0.5~1.0μm。

6.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤二中,所述壳聚糖的粘均分子量为5.0×105,脱乙酰度为80~85%;所述聚乙烯醇重均分子量为180000~200000;

所述聚氧化乙烯重均分子量为1×106~1×107;所述乙酸水溶液体积浓度为1~2%;所述壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯的质量比为1~2:2~4:7~9,以总的质量浓度1.5~2%溶解于乙酸水溶液中。

7.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤二中,所述甘油的加入量与乙酸水溶液的质量体积比为1~2g/L;所述蛹虫草原生质体硅质体悬液的加入量与乙酸水溶液的体积比为1:100~500。

8.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤二中,所述静电纺丝的接收装置采用铝箔,喷头到接收装置的距离为5~30cm,电压为3~30KV,喷射流量为1~

5mL/h。

9.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤三中,所述混合水溶液中葡萄糖浓度为10~15g/L,核糖浓度为20~30g/L,磷酸二氢钾浓度为0.5~1g/L,硫酸镁浓度为0.5~0.8g/L,酵母粉浓度为5~8g/L,腺嘌呤浓度为4~8g/L;所述混合水溶液的pH值调至5.0~5.8。

10.根据权利要求1所述的生产虫草素的方法,其特征在于,步骤三中,所述混合水溶液的流速为0.2~0.5mL/h;层析柱中无菌空气的通气量为1.0~2.0V/V·min,层析柱夹套温度控制在25~27℃。