1.一种基于石墨烯信号放大作用用于凝血酶检测的超灵敏均相电化学适体传感器,其特征是:所述电化学适体传感器包括用于检测凝血酶浓度的检测探针和与所述探针相配合使用的检测电极,其中,所述检测探针是:包括修饰有凝血酶适体1的磁性微球MNP-TBA1和修饰有凝血酶适体2的羟基磷灰石HAP-TBA2,其中,所述修饰有凝血酶适体1的磁性微球MNP-TBA1和修饰有凝血酶适体2的羟基磷灰石HAP-TBA2与目标物凝血酶形成MNP-TBA1-凝血酶-HAP-TBA2的三明治结构,所述检测电极为通过电沉积方法得到的还原氧化石墨烯修饰的玻碳电极edGO/GCE;其中,所述三明治结构中的HAP与钼酸盐溶液在edGO/GCE表面生成磷钼酸盐沉淀,形成的复合体即为基于石墨烯信号放大作用用于凝血酶检测的超灵敏均相电化学适体传感器。
2.如权利要求1所述的电化学适体传感器,其特征是:所述凝血酶适体1的序列如SEQ ID NO:1所示,所述凝血酶适体2的序列如SEQ ID NO:2所示。
3.如权利要求1所述的电化学适体传感器,其特征是:所述检测探针的制备方法包括以下步骤:磁性微球与凝血酶适体1反应得到修饰有凝血酶适体1的磁性微球;
羟基磷灰石与凝血酶适体2反应得到修饰有凝血酶适体2的羟基磷灰石。
4.如权利要求3所述的电化学适体传感器,其特征是,修饰有凝血酶适体1的磁性微球制备步骤如下:清洗MNP,然后浸入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺混合液,磁分离后,将MNP浸入TBA1溶液中反应,然后磁分离,得到修饰有凝血酶适体1的磁性微球。
5.如权利要求3所述的电化学适体传感器,其特征是,修饰有凝血酶适体2的羟基磷灰石制备步骤如下:HAP浸入聚醚酰亚胺溶液中一定时间,离心清洗后,浸入戊二醛溶液中一定时间,离心清洗后,浸入TBA2的溶液中进行反应,得到修饰有凝血酶适体2的羟基磷灰石。
6.如权利要求1所述的电化学适体传感器,其特征是,所述检测电极是通过以下方法制备得到的:(1)将氧化石墨烯完全浸入到PBS缓冲溶液中,超声得到分散良好的氧化石墨烯胶体溶液;
(2)将玻碳电极抛光成镜面,经乙醇和二次水超声清洗,干燥得到处理后的玻碳电极;
(3)将处理后的玻碳电极浸入氧化石墨烯胶体溶液中,通过电沉积方法得到还原氧化石墨烯修饰的玻碳电极edGO/GCE。
7.一种如权利要求6所述的电化学适体传感器,其特征是,所述检测电极是通过以下方法制备得到的:步骤(1)中,所述石墨烯与PBS缓冲溶液的添加量比例为5mg:5~10ml;超声时间为5~
10min;
步骤(2)中,将玻碳电极按顺序在麂皮上用0.3μm和0.05μm的Al2O3粉打磨;超声时间为
20~60s;干燥为在氮气吹干;
步骤(3)中,电沉积电位为-1.5V-0.5V,扫速为25mV/s,扫描圈数为20圈。
8.如权利要求1所述的电化学适体传感器,其特征是:所述用于检测凝血酶浓度的检测探针在制备基于石墨烯信号放大作用用于凝血酶检测的超灵敏均相电化学适体传感器中的应用。
9.权利要求1所述的电化学适体传感器在检测凝血酶中的应用。
10.一种采用权利要求1所述的电化学适体传感器检测凝血酶的方法,其特征是,包括以下步骤:(1)将含有不同浓度凝血酶的权利要求5所述的电化学适体传感器在H2SO4溶液作为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,构成三电极系统,用伏安法检测,得到不同浓度凝血酶检测标准电极的伏安曲线,将不同浓度凝血酶的伏安曲线的峰电流对其浓度的对数做线性回归方程;
(2)将待测凝血酶样品的权利要求5所述的电化学适体传感器在H2SO4溶液作为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,构成三电极系统,用伏安法检测,得到该待测凝血酶样品的伏安曲线,将该待测凝血酶样品的伏安曲线的峰电流带入步骤(1)中的线性回归方程即可得到待测凝血酶样品的浓度。
11.如权利要求10所述的方法,其特征是:步骤(2)中伏安法检测的电位范围为0V~
0.5V,扫速为100mV/s,室温下进行。