1.一种与吊白块特异性结合的核酸适配体Sf-E07,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的与吊白块特异性结合的核酸适配体Sf-E07,其特征在于:二级结构均具有突出的环和茎,且存在G-四链体结构,吉布斯自由能分别为DG=-10.78。
3.权利要求1所述的与吊白块特异性结合的核酸适配体Sf-E07在制备识别吊白块的试剂或在制备检测吊白块的试剂盒中的应用,其特征在于:与核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的核酸适配体Sf-B09搭配使用。
4.根据权利要求3所述的应用,所述试剂盒为基于核酸适配体的层析法检测试剂盒,其包括检测试纸,所述检测试纸包括底板(1),粘在底板(1)上且依次搭接的样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(7);所述硝酸纤维素膜(4)上靠近结合垫(3)的一侧设有检测线(5),硝酸纤维素膜(4)上靠近吸水垫(7)的一侧设有质控线(6);其特征在于:结合垫(3)上涂有胶体金标记的核酸适配体Sf-E07;检测线(5)上涂有核酸适配体Sf-B09与链霉亲和素的复合物;质控线(6)上涂有链霉亲和素溶液。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:核酸适配体Sf-E07的核苷酸序列5’端被生物素标记,3’端被巯基标记;核酸适配体Sf-B09的核苷酸序列5’端被生物素标记。
6.制备权利要求4或5所述试剂盒的方法,包括如下步骤:
(1)用胶体金标记核酸适配体Sf-E07;
(2)将样品垫放入含有3%牛血清蛋白、0.05%吐温-20的0.01M pH 7.4磷酸缓冲液溶液中浸泡1 小时以上,37℃烘干备用;
(3)将结合垫放入含有5%牛血清蛋白、1%聚乙二醇-20000、0.05%吐温-20、5%蔗糖的
0.01M pH 7.4磷酸缓冲液溶液中浸泡1 小时以上,37℃烘干备用;
(4)将步骤(1)被胶体金标记的核酸适配体Sf-E07悬浮于含有5%牛血清蛋白、1%聚乙二醇-20000、0.05%吐温-20、5%蔗糖的0.01M pH 7.4磷酸缓冲液溶液中,并喷于步骤(3)活化过的结合垫上,37℃烘干备用;
(5)在硝酸纤维素膜上检测线位置以0.5-1.5μL/cm的流量喷点核酸适配体Sf-B09与链霉亲和素的复合物,在质控线位置以0.5-1.5μL/cm的流量喷点链霉亲和素溶液,烘干备用;
(6)将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接并粘合于底板上,切成检测试纸条,组装于硬质塑料卡包装。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于:步骤(1)是用直径20-40nm的胶体金标记核酸适配体Sf-E07;步骤(5)中喷点于检测线位置的核酸适配体Sf-B09与链霉亲和素的复合物是将浓度为25-35μM的核酸适配体Sf-B09溶液与浓度为0.5-1.5μL/cm的链霉亲和素溶液按体积比5-3:1混合制备而成;喷点于质控线位置的链霉亲和素溶液是将链霉亲和素溶于0.01M pH7.4磷酸缓冲液溶液中制得,浓度为0.5-1.5mg/mL。