利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2017103297437
申请人: 青岛大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-09-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种采用电化学传感器检测甲胎蛋白的方法,该方法为非疾病诊断和治疗方法,其特征是,包括以下步骤:(1)采用电化学工作站的三电极体系进行检测,以结合了目标分析物的电化学传感器为工作电极,以银-氯化银电极、铂丝电极为参比电极和对电极,交流阻抗测试参数设置:频率范围为0.05~100KHz,交流微扰振幅为5mV,极化电路选择开路电位;

(2)将三电极浸没于含4~10mM铁氰化钾的PBS电解质溶液中进行交流阻抗测试,不同浓度甲胎蛋白溶液孵化的传感界面,其阻抗信号大小不同,据此绘制工作曲线;

(3)采用以上方法对实际样品中的甲胎蛋白进行分析检测;

其中,所述电化学传感器是通过以下方法制备得到的:以羧基化氧化石墨烯为基底,通过碳二亚胺反应在基底上嫁接氨基化甲胎蛋白适体,得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物;

然后以该氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物修饰玻碳电极,并用牛血清蛋白封闭修饰后玻碳电极上的非特异性吸附位点,得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物-电极;具体方法包括:将3~10μL氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物分散液滴涂于玻碳电极表面,晾干后,将4~8μL质量分数为0.5%~1.5%的牛血清蛋白滴涂于修饰后的玻碳电极表面,并孵化15~60min,以封闭传感界面的非特异性结合位点,即得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物-电极;

再将氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物-电极浸于不同浓度的甲胎蛋白中孵化;孵化结束后,取出电极并洗涤,得到捕获有目标分析物甲胎蛋白的氧化石墨烯/甲胎蛋白适体电化学传感器;

其中,氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物的制备方法包括以下步骤:

(1)将2~6mg氧化石墨烯于1~3ml去离子水中超声分散1~1.5h,得到分散均匀的氧化石墨烯悬乳液;

(2)向获得的氧化石墨烯悬乳液中加入0.3~0.6g NaOH和0.2~0.5g氯乙酸,并超声处理10~12h,以增加氧化石墨烯上的羧基;

(3)将经过羧基化的氧化石墨烯离心洗涤后,加入1~4ml0.3M的1-(3-二甲氨基丙基)-

3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1~3ml 0.2M的N-羟基琥珀酰亚胺,并进行超声处理1~1.5h,以活化氧化石墨烯上的羧基;

(4)将经过活化的氧化石墨烯离心洗涤后,加入0.5~1ml浓度为30~250μg/ml的氨基化甲胎蛋白适体溶液孵化20~40min,以将甲胎蛋白适体链嫁接到氧化石墨烯表面;

(5)将步骤(4)中获得的氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物进行离心洗涤,以除去未结合的甲胎蛋白适体,然后将离心洗涤后所得复合物用PBS溶解,并超声分散得到均匀分散液,即得到氧化石墨烯/甲胎蛋白适体复合物分散液。

2.如权利要求1所述的方法,其特征是,在修饰玻碳电极之前,对玻碳电极进行预处理,预处理方法为:将玻碳电极依次用粒径为0.3μm、0.05μm的三氧化二铝抛光粉处理,并先后用乙醇、去离子水将玻碳电极超声清洗干净。

3.如权利要求1所述的方法,其特征是,玻碳电极的直径为3mm。

4.如权利要求1所述的方法,其特征是,将封闭后的玻碳电极浸没于1~2mL含0.00001~100ng/mL甲胎蛋白的PBS溶液中孵化15~60min。