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专利号: 2017101924693
申请人: 宿州学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株在培养基中培养发酵,发酵液离心后得到含γ-谷氨酰转肽酶的湿菌体;

(2)将上述湿菌体中加入转化液,所述转换液包括:L-谷氨酸-γ-甲酯、正丁胺以及3-甲氧基丁基乙酸酯、乙酸丁酯、戊醇、正己醇中的一种;

(3)在35-50℃,pH 6-11条件下进行酶促反应,再采用等电点结晶法分离得到γ-L-谷氨酰正丁胺。

2.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株具体为大肠杆菌ATCC15489、铜绿假单胞菌CGMCC NO:1.1129、施氏假单胞菌CGMCC NO:1.202、枯草芽孢杆菌CGMCC NO:1.1628中的一种。

3.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中培养基的配方为:碳源物质、氮源物质、2.0g/L柠檬酸、2.5g/L硫酸铵、5.0g/L K2HPO4、2.5g/L MgSO4、0.07g/L CaCl2、0.002g/L CoCl2和0.0001g/L MnC4H6O4·4H2O。

4.根据权利要求3所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述碳源物质的总碳源质量浓度为10-45g/L,且具体为葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖中的一种或多种。

5.根据权利要求3所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述氮源物质的总氮源质量浓度为5-40g/L,且具体为牛肉膏、酵母膏、玉米浆、蛋白胨、豆饼水解液中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中L-谷氨酸-γ-甲酯、正丁胺的浓度分别为5-80g/L、10-120g/L。

7.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中3-甲氧基丁基乙酸酯、乙酸丁酯、戊醇、正己醇的浓度为0.001-5.0g/L。

8.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中采用等电点结晶法分离得到γ-L-谷氨酰正丁胺的具体方法为:(1)将酶促反应后的转化液于3000-5000r/min环境下离心10-20min,去除菌体细胞;

(2)加热转化液,再进行脱色、抽滤处理,并将脱色液进一步地通过离子交换树脂柱吸附,用2-4%氨水洗脱,收集洗脱液;

(3)调至pH 3-4,静置析出沉淀,真空抽滤,烘干得γ-L-谷氨酰正丁胺粗品;

(4)采用乙醇洗涤,真空抽滤,烘干得γ-L-谷氨酰正丁胺精品。

9.根据权利要求8所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述脱色处理具体为活性碳脱色处理。

10.根据权利要求8所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法,其特征在于,所述离子交换树脂柱具体为732型阳离子交换树脂柱。