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专利号: 2017101577096
申请人: 辽宁大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种水产养殖动物体内溶藻弧菌的PCR检测方法,其特征在于:方法如下:

1)提取水产养殖动物组织的总DNA;

2)以所提取的DNA为模板,采用溶藻弧菌特异性引物,进行PCR扩增;所述的溶藻弧菌特异性引物是针对溶藻弧菌的topA基因的特异性引物P1、toxR基因的特异性引物P2、toxR基因的特异性引物P3;

3)根据PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果判断水产养殖动物是否被溶藻弧菌感染。

2.根据权利要求1所述的一种水产养殖动物体内溶藻弧菌的PCR检测方法,其特征在于:所述的溶藻弧菌是Vibrio alginolyticus。

3.根据权利要求1所述的一种水产养殖动物体内溶藻弧菌的PCR检测方法,其特征在于:所述的特异性引物P1的序列为:

P1-F:TCGCTTCATGGACCGTGTCP1-R:GGCGCTTAGGTTAGTCGAGT所述的特异性引物P2的序列为:

P2-F:CTGACGTTGAAGAAGCCACTTP2-R:GGCGTCATCACAGGTACATTTT所述的特异性引物P3的序列为:

P3-F:CCTAAACGCGGTTATCAACTCAP3-R:GGCGTCATCACAGGTACATTTT。

4.根据权利要求1所述的一种水产养殖动物体内溶藻弧菌的PCR检测方法,其特征在于:PCR扩增的反应体系和反应条件如下:PCR反应条件:第一阶段:94℃5min;

第二阶段:94℃30s,60℃或69℃30s,72℃30s;30循环;

第三阶段:72℃5min;

第四阶段:4℃保存。

5.根据权利要求1所述的一种水产养殖动物体内溶藻弧菌的PCR检测方法,其特征在于,步骤3)中,判断标准为,

针对特异性引物P1,如果PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果有484bp条带产生,则水产养殖动物被溶藻弧菌感染,否则没有被感染;

针对特异性引物P2,如果PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果有286bp条带产生,则大菱鲆被溶藻弧菌感染,否则没有被感染;

针对特异性引物P3,如果PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果有353bp条带产生,则海参被溶藻弧菌感染,否则没有被感染。

6.根据权利要求1所述的一种水产养殖动物体内溶藻弧菌的PCR检测方法,其特征在于,所述的水产养殖动物为大菱鲆、海参、泥鳅鱼、螃蟹、爬虾、青虾或三文鱼。